外泌体(Exosomes)来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的囊泡,是由活细胞分泌而来,是一类大小介于30-200nm的含有DNA、RNA、蛋白质和脂类的微囊,几乎所有类型的细胞都能分泌,普遍存在于血清、血浆 、尿液等各种体液中。Exosomes 参与调控重要的细胞生理活动,在免疫应答、凋亡、血管生成、炎症反应、凝结过程中的作用均有报道,成为多种疾病医治的潜在靶点、早期诊断标记物、靶向药物载体等,成为近年来生命科学及医学领域的重要研究热点。外泌体是细胞分泌的大小为40-100nm的盘状囊泡,分布于人体体液。吉林测序外泌体平台
纳米颗粒跟zong分析技术(Nanosight Tracking Analysis,NTA)是一种比较新颖的表征纳米颗粒的方法,它可直接并实时观测纳米颗粒。NTA 通过光学显微镜收集纳米颗粒的散射光信号,拍摄一段纳米颗粒在溶液中做布朗运动的影像,对每个颗粒的布朗运动进行追zong和分析,从而计算出纳米颗粒的流体力学半径和浓度。 通过SDS-PAGE电泳分析得到Exosome中蛋白的含量及种类;通过Western-Blot检测Exosome中特定的蛋白表达情况。外泌体可被大多数细胞分泌,并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分,还包括一些RNA成分。山西外泌体环状RNA表达具有组织和疾病特异性,与组织发育、疾病发生和发展密切相关。
H.Valadi等发现,细胞之间可以通过外泌体中的RNA来交换遗传物质。这意味着细胞可以通过外泌体影响另外一个细胞,甚至可以把自己的基因强加给另外一个细胞。研究人员逐渐对小小的外泌体产生了极大的好奇。他们发现,tumour细胞的外泌体与正常细胞的外泌体之间存在差异,tumour的外泌体会促进tumour的生长和转移,tumour周围组织细胞分泌的外泌体具备杀伤tumour细胞的能力,等等。2013年的诺贝尔生理或医学奖颁给了三位科学家,他们分别是美国科学家James E. Rothman和Randy W. Schekman,德国科学家Thomas C. Südhof,以表彰他们发现细胞内部囊泡(外泌体等)运输调控机制。使外泌体的研究达到全新的高度。就外泌体的研究方向而言,干细胞、免疫、microRNA、靶向给药、ai症的诊断及医治等都是热门研究领域。
超速离心法既耗时又费力。现在您可以通过使用灵活可控的总外泌小体分离试剂,从不同的起始样本中方便地富集完整的外泌小体。这些试剂及其配套的试验方案完美适用于普遍的实验计划,包括小输入样本量和多种样本处理实验。 从培养细胞中富集的总外泌小体(使用总外泌小体分离试剂或超速离心)可以通过免疫磁性捕获法进一步纯化为亚组分。可使用基于Dynabeads?的CD63特异性试剂,或将链霉亲和素试剂与特定的生物素化抗体结合使用,可基于表面抗原的免疫反应纯化得到任何所需的亚组分。外泌体无论在疾病诊断、微环境调控机制还是在药物载体改造等方面都受到了越来越多的关注。
外泌体蛋白有以下几类:外泌体中常见的蛋白质多与其生物发生机制有关,外泌体含有的细胞质蛋白,如膜蛋白和RAB蛋白,可以促进MVBs与细胞膜的融合及外泌体的释放;Tsg-101及附属蛋白质Alix参与ESCRT过程,促进内体膜的凹陷。外泌体含有参与抗原呈递的蛋白质,如CD1、MHCⅠ和MHCⅡ,其在免疫调节中发挥重要作用,MHCⅠ还参与向T细胞呈递抗原的生理过程。外泌体表面还存在热休克蛋白,如HSP70和HSP90,促进了抗原肽与MHCⅠ及MHCⅡ的结合。外泌体含有信号转导蛋白,如G蛋白和蛋白激酶。外泌体含有丰富的蛋白水解酶,这表明外泌体能够促进细胞转移。外泌体中还含有细胞质微管蛋白、肌动蛋白和肌动蛋白结合蛋白。但目前未发现外泌体中含有与内质网、高尔基体和细胞核相关的蛋白质。外泌体对凝血和血管生成其促进作用。山西外泌体
常规的转录组测序采用Oligo d(T)法纯化带Poly(A)尾巴的RNA分子。吉林测序外泌体平台
除此之外,细胞还可以释放膜囊泡,外泌体与微泡就是其中两种,二者相似但形成方式不同:外泌体是细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中的膜囊泡,而微泡则是细胞出芽与细胞膜融合后直接脱落形成的囊泡,且外泌体大小均一, 直径在40~100 nm,其大小取决于其起源部位以及细胞中的脂质双层结构;而微泡大小不一,直径在50 ~1000 nm之间。外泌体的组成:外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP 70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白,但是不同来源的外泌体的组成有差异。吉林测序外泌体平台
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