河北RIP环状平台

研究思路： 作者首先分离了采用除草剂处理的雄性非洲爪蟾的睾丸组织，提取RNA，通过全转录组测序检测样本中环状RNA的表达变化。结果发现405个差异表达的环状RNA，其中44条上调和361条下调，这暗示着这些环状RNA可能在AZ污染过程中发挥作用。接下来通过环状RNA定量PCR检测和RNase R耐受性实验验证了环状RNA的表达量和结构。随后通过生信分析如GO及KEGG分析对差异表达的环状RNA进行了功能预测。GO分析表明这些RNA分子主要参与19条信号通路，其中Wnt信号通路和黄体酮介导的卵母细胞成熟通路可能是AZ污染涉及的信号通路。CircRNA-miRNA互作网络图揭示了环状RNA作用靶miRNA及可能的功能。本文研究了非洲爪蟾的环状RNA表达谱，为后续分子机理详细研究提供诸多靶分子。不同物种中鉴定的cirRNA数目是不一样的。河北RIP环状平台

研究思路： 本文首先基于高通量手段比较了小鼠中LT-HSC，ST-HSC和MPPs中全转录组变化，共发现156种明显性差异表达的circRNAs。表达量验证证实9个circRNA在LT-HSC中明显性上调。在细胞表型层面，发现只有干扰D430042O09Rik转录的circRNA——Cia-cGAS后，可明显改变造血干细胞的亚群分布，作者因此锚定Cia-cGAS进行机制分析。作者通过Cas-9基因敲除策略成功构建了Cia-cGAS基因敲除小鼠，在Cia-cGAS基因敲除小鼠中LT-HSC明显性减少，I型IFN表达升高。通过RNA Pull-down实验，作者发现Cia-cGAS可以与cGAS结合，cGAS-RIP实验反向证实二者之间具有直接的相互作用。后续，作者通过生信预测结合EMSA实验分析了Cia-cGAS与cGAS相互作用的位点信息。酶学研究证明，Cia-cGAS可通过结合cGAS并抑制其活性。甘肃m1A环状测序circRNA形成没有3’末端和5’末端的共价环状结构。

研究背景： 造血干细胞（HSC）自我更新和分化之间的平衡打破将导致骨髓衰竭及恶性血液tumour发生。然而，HSCs如何维持其静止状态并避免I型干扰素（IFN）介导能量耗竭、细胞凋亡仍未可知。本文一种名为cia-cGAS的环状RNA，它在长效（LT）-HSCs细胞核中高度表达。小鼠Cia-cGAS缺陷将导致I型IFN在骨髓中高表达并伴随静息LT-HSC数量明显减少。在稳态条件下，cia-cGAS在细胞核中通过结合DNA传感器cGAS以阻断其合酶活性，由此保护静息LT-HSC免于被cGAS介导耗尽凋亡。此外，cia-cGAS与线性cGAS相比，与cGAS结合亲和力更强，由此抑制cGAS介导LT-HSCs中I型IFN产生。本文揭示了一个新型环状RNA——cia-cGAS可结合DNA敏感的cGAMP合酶cGAS并抑制其活性，调控长效造血干细胞（LT-HSC）静息状态。

研究一：环状RNA分子筛选及验证 为探索造血干细胞功能相关的circRNA分子，作者比较了小鼠不同造血干细胞（LT-HSC，ST-HSC和MPPs）中全转录组变化情况，找出了156种明显性差异表达的circRNA分子，其中49种在LT-HSC中高表达。RNase R及qPCR实验证实其中9种为真实LT-HSC中高表达环状RNA 分子。为有效筛选造血干细胞相关的circRNA分子，作者通过体内circRNA干扰实验，发现只有干扰Cia-cGAS后才能明显影响小鼠体内造血干细胞亚群分布，并表现为LSK祖细胞数量明显增加，与此同时LT-HSC细胞数量明显减少。因此，作者结合转录组数据以及体内、体外验证实验，锚定Cia-cGAS分子进行后续分子机制研究。circRNA的类型比想象的要复杂，可以来自基因组上多种基因结构。

2.环状RNA定量PCR及RNase R耐受实验，验证环状RNA的表达和结构 为了验证测序结果的准确性，研究人员随机选取了8条差异表达的环状RNA，利用“divergent primers”进行环状RNA定量PCR检测和RNase R耐受性实验。所有环状RNA的表达都能够被定量PCR实验检测到，并且定量PCR结果与测序结果趋势一致，表明环状RNA测序结果准确性非常高。所有环状RNA都能抵抗RNase R的消化，进一步证实了这些RNA的环形结构。云序生物作为国内早期提供环状RNA测序的测序公司，自行建立的环状RNA数据库circDB，借物种覆盖广、数据量大、疾病背景多的特点为客户提供好的服务。环状RNA在tumour领域的研究非常热门。吉林云序环状

m7G RNA甲基化是在甲基化转移酶的作用下，使RNA鸟嘌呤（G）的第七位N上加上甲基的一种修饰。河北RIP环状平台

样本要求 样品类型： 组织、细胞、体液或总RNA样品。其它类型样品请咨询工作人员。 样品量： a)细胞：2×106 b)组织：50 mg c)体液：全血、血清、血浆 2-3 ml 脑脊液：5 ml 尿液：50 ml d)总RNA：2 μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5 无明显降解，电泳检测样品特征性条带完整清晰，无明显弥散或拖尾 ) 样品运输及保存： 样品运输：样品置于1.5mL管中，封口膜封好，干冰运输。 样品保存：细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存;血液样品应使用EDTA抗凝，不可用肝素;RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存，避免反复冻融。河北RIP环状平台

上海云序生物科技有限公司坐落在上海市松江区新桥镇莘砖公路518号20幢302室-2，是一家专业的上海云序生物科技有限公司于2015年3月成立，坐落于上海漕河泾新兴技术开发区，专注于表观修饰以及转录组领域，依托于高通量测序、定量PCR、质谱技术和生物信息学等技术，集科研服务、医学检测、产品研发于一体的****。公司。目前我公司在职员工以90后为主，是一个有活力有能力有创新精神的团队。诚实、守信是对企业的经营要求，也是我们做人的基本准则。公司致力于打造***的RNA甲基化，表观遗传学，转录组测序，外泌体。公司凭着雄厚的技术力量、饱满的工作态度、扎实的工作作风、良好的职业道德，树立了良好的RNA甲基化，表观遗传学，转录组测序，外泌体形象，赢得了社会各界的信任和认可。