钙离子在很多生理性的活动中都发挥着重要作用,除了在肌肉细胞收缩中扮演着重要角色,钙离子也是神经元活动的重要“风向标”之一:当神经元膜电位发生去极化,产生的动作电位传导到神经元轴突末梢时,细胞膜上的电压门控钙离子通道打开,大量钙离子内流,包含神经递质的囊泡由突触前膜释放至后膜,下游神经元就得以接受到上游的信号。因此,钙离子成像可以追踪神经元动作电位,从而帮助我们了解神经元集群的活动,可以用于感知觉,学习记忆,社会性行为等各种各样的研究中。双光子荧光显微镜的发展,使在实验动物处于活动状态下的钙成像技术取得了飞速进展。深圳钙成像生产厂家
在神经系统研究中,我们常使用钙指示剂表征钙离子浓度变化,以反映神经元的活动。常见的钙成像方法有双光子荧光成像和单光子荧光成像两种,其中后者是研究脑神经活动的常用方法。但与双光子成像相比,单光子成像更易受到来自神经元的高水平串扰,导致信噪比降低。不仅如此,采集活动信号时还易被来自近距离通过的轴突和树突的信号所污染,造成的非特异性信号,这些均严重影响对神经元活动反应的精细成像。因而,在单光子荧光成像的基础上,研究团队在细胞核中表达遗传编码的钙指示剂,从而消除神经纤维信号。但与经典的胞质钙成像相比,钙进入细胞核的要求降低了这种成像的时间精度。浙江荧光钙成像inscopix有了钙成像技术,原本悄无声息的神经活动就变成了一幅斑斓闪烁的壮观影像。
在生物有机体,钙离子产生各种各样的胞内信号,这些胞内信号几乎在每种类型的细胞中都存在,且在很多功能方面有重要作用,例如对心肌细胞收缩的控制和从细胞增殖到细胞死亡整个细胞周期的调节等。在哺乳动物的神经系统中,钙离子是一类重要的神经元胞内信号分子。在静息状态下,大部分神经元的胞内钙离子浓度为50-100nM,而当神经元活动的时候,胞内钙离子浓度能上升10-100倍,增加的钙离子对于包含有神经递质的突触囊泡的胞吐释放过程必不可少。也就是说神经元的活动与其内部的钙离子浓度密切相关,神经元在放电的时候会爆发出一个短暂的钙离子浓度高峰。神经元钙成像(calciumimaging)技术的原理就是借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系,利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针(钙离子指示剂,calciumindicator),将神经元当中的钙离子浓度通过荧光强度表现出来,从而达到检测神经元活动的目的。
CaMPARI,一种能够兼顾全局和微观的新型钙成像技术,包含CaMPARI以及CaMPARI2(第二代)。其原理在于,CaMPARI蛋白在正常状态下会发出绿色荧光,而如果对这种蛋白同时使用高浓度钙离子与紫外光处理,它就会不可逆、长久地转变成另一种能发出红色荧光的构象,即实现将瞬间的神经元活动变成长久的红色荧光蛋白表达。研究人员通过转基因技术将这种新型蛋白导入到实验动物的神经系统中,然后用度的紫外光照射动物的大脑,通过检查荧光,找到发红色荧光的神经元,这些神经元即是在紫外光照射期间活跃的神经元。由于紫外光可以对着整个大脑进行照射,所以理论上,人们可以对全脑进行检查。长时间追踪相同细胞,进行可重复的科学研究对自由行为动物进行慢性钙成像研究。
哥伦比亚大学ZuckermanMind大脑行为研究所的RuiM.Costa课题组于2020年10月7日在Cell杂志上发表了一篇题为AnAmygdalaCircuitMediatesExperience-DependentMomentaryArrestsduringExploration的文章,作者开发一种用于研究小鼠探索活动中瞬时停滞行为机制的新型实验,通过行为分析、环路映射、滔博生物-Inscopix自由活动钙成像显微镜结合光遗传学手段,提供介导经验依赖性的瞬时停滞行为的BLA神经元群体的jihuo和投射证据,表明BLA-CEA环路可以作为新颖/熟悉情境的检测器和效应器,用于基于空间位置的熟悉程度来生成自定进度的行为停滞,这一响应对于动物对未知环境进行安全有效的探索是至关重要的。钙信号在大脑皮层中更能反映神经元的活性,因此神经元钙信号的检测对研究大脑皮层功能至关重要。深圳荧光显微钙成像nVoke
钙成像系统在自由行为动物上对钙离子动态进行单细胞分辨率级别的持久成像。深圳钙成像生产厂家
钙离子通过参与多种细胞内信号传导途径来调控绝大多数类型神经元的功能。由于钙离子信号在已知的细胞器结构中发挥其特定的功能,钙离子成像显得尤为重要。在神经系统中,由于神经元的多样性,导致钙离子功能也多样化。在突触前膜,钙内流激发贮存神经递质的神经小泡向胞外释放;在突触后膜,树突棘内钙水平瞬间升高,介导了突触可塑性;在细胞核内,钙信号能够调控基因转录。现在常使用的钙离子指示剂有化学性钙离子指示剂(ChemicalIndicators)和基因编码钙离子指示剂(GeneticallyEncodedIndicators)两类。深圳钙成像生产厂家