重庆无血清细胞冻存液

细胞冻存的操作步骤：1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；2.取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。3.去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；4.离心1000rpm，5min；5.去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的较终密度为5×106/ml～1×107/ml；6.将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5ml；7.在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；8.冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。快速冻存即不需要经过梯度降温，直接将细胞放入-80 ℃冰箱24h。重庆无血清细胞冻存液

细胞冻存液的作用是什么？渗透性冷冻保护剂：可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。非渗透性冷冻保护剂：不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及Hetastarch等。冷冻保护剂同溶液中的水分子结合，发生水合作用，弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成，同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质的损伤。渗透性冷冻保护剂的保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前，渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤同时。细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。厦门正规无血清细胞冻存液服务电话无血清冻存液特性：适合各种动物细胞。

细胞冻存秘籍：冷冻保护剂冷冻保护剂对于冷冻过程中细胞发生的损伤较小化是必要的。较常见的冷冻保护剂是二甲基亚砜（DMSO）和甘油。 DMSO（ATCC目录号4-X，5×5mL），常用浓度为5至10％（v / v）;较适浓度因细胞系而异。注意： DMSO是一种非常强大的溶剂，能够迅速渗透完整的皮肤。因此避免直接接触DMSO，并妥善处理含有DMSO的废物。另外，选择DMSO时，确保使用无毒的产品。ATCC出售的DMSO，已经经过完全测试，以确保其无毒（ATCC目录号4-X，5×5mL）。甘油常用终浓度为5％至15％。较佳浓度取决于细胞系。通常，增加冻存培养基中的血清浓度来增加难以保存细胞的存活率。有时使用高达90％至95％的血清浓度（无培养基，*血清加上低温保护剂）。A. 用冻存培养基重悬细胞，使较终细胞浓度达到每毫升2-5百万个活细胞。B. 在冻存管上标记好细胞名称，编号和冻存日期等信息。然后将1.0到1.8毫升的细胞悬液加入到细胞冻存管中并密封。

细胞冻存，我们应该注意哪些事项：1、冻存液比例一般是培养基：血清：DMSO=7:2:1或5:4:1；动物种属的原代细胞冻存液可采用的比例是培养基：血清：DMSO=0:9:1，即直接用血清重悬细胞再加入DMSO，尽管如此，原代细胞的复苏成活率还是很低。2、有文献表明，细胞以l℃/min的速度冷冻存活率较髙，因为这一速度可以很好的控制细胞内部晶体的产生。我们实际操作不可能将速度控制的这么精确，目前惯用的就是4℃30min、-20℃ 1h30min、-80℃ 2h后转入液氮中。无血清细胞冻存液存储条件：为避免重复冻融过程可能导致的冻存液品质下降和性能降低。

无血清细胞冻存液与传统细胞冻存液比较及优势：1.传统细胞冻存液只适用于含血清细胞的冻存，但并不适用于无血清培养的细胞，例如一些CIK细胞等，而无血清细胞冻存液即适用于含血清细胞的冻存，又适用于无血清细胞的冻存，是一种通用型细胞冻存液，通用于各种动物细胞株；2.传统细胞冻存液含10%胎牛血清，因血清是动物源性成份，因此病毒、霉菌和支原体等污染的风险很高，而无血清细胞冻存液因不含血清，只含DMSO、葡萄糖等营养成份，较大降低了动物血清来源病毒、霉菌和支原体等污染的风险，确保冻存细胞的安全；3.传统细胞冻存液含血清，但动物血清成分复杂，个体差异大，且生产来源不稳定，因此批次间质量常常不稳定，这导致培养细胞的状态也会受到影响，而无血清细胞冻存液成分和配比明确，批次间差异很小，能够保证生长细胞状态的稳定性，细胞存活率高。清洗细胞，充分洗净残留冻存液。太原正规无血清细胞冻存液厂家现货

无血清细胞冻存液：降低细胞外溶液的电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量。重庆无血清细胞冻存液

通用细胞冻存液(无血清)的简介：随着实验室细胞培养的发展，除了原代培养之外，人工开发出来的细胞系的保存越来越重要。细胞冷冻的原理在于尽可能降低细胞内的晶体形成，减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，从提高细胞复苏时的存活率。细胞冻存的数量应保证复苏时低温保护剂获得稀释，稀释后的细胞浓度扔高于正常传代的细胞浓度为宜，这是因为当低温保护剂稀释以后，该浓度一般不会对细胞造成毒性损伤。通用细胞冻存液(无血清)主要由培养基、DMSO 等组成，不含血清，是一种经典的无菌冻存液。用于各种哺乳动物原代细胞、传代细胞系、杂交瘤细胞等的冻存。重庆无血清细胞冻存液

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