胶原蛋白的提取方法:酸法提取:酸法提取主要采用低离子浓度酸性条件浸渍处理原料,从而破坏分子间的盐键和希夫碱,而引起纤维膨胀、溶解。作为溶剂使用的酸,主要有盐酸或亚硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、柠檬酸和甲酸等。酸法是提取胶原蛋白比较常用和有效的方法,用酸法提取的胶原较大程度地保持了其三股螺旋结构。此法处理快速,所得产品的分子量是连续的,适用于医用生物材料及原料的制备,但产品得率低,设备腐蚀严重,污染重。赵苍碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下从牛腱中提取胶原蛋白,得到高纯度的胶原蛋白溶液。鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上,pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶。珠海鼠尾胶原推荐厂家
鼠尾胶原包被培养板:胎干细胞在体外可诱导分化为血管内皮细胞,进而形成血管,因而成为血管组织工程理想的种子细胞来源之一。目的:探讨建立定向诱导人胚胎干细胞向血管内皮细胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养人胚胎干细胞H1,将H1细胞团块转移到鼠尾胶原包被的培养板,贴壁24-48h后,培养基换为含不同辅助因子和内皮细胞生长添加剂的EGM-2内皮细胞培养基。结果与结论:①在EGM-2内皮细胞培养基诱导下,细胞逐步表达内皮细胞特异性标记基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化细胞表达内皮细胞特异性标记VE-cadherin、CD31。③分化细胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。说明将人胚胎干细胞接种在鼠尾胶原包被培养板上,通过EGM-2内皮培养体系诱导,可直接分化为功能性血管内皮细胞。为研究胞外基质对诱导胚胎干细胞血管内皮细胞分化的作用以及相关信号分子机制打下了基础。金华珠海鼠尾胶原胶原的立体结构与一般的球状蛋白质完全不同。
鼠尾胶原的提取步骤:离心胶原溶液(1600rpm,15 min),取上清;置300 目筛网于滤器(高压灭菌)中,抽滤上清 每600mL 上述粗提液中加100 mL 0.14 mol/L NaOH 溶液,离心(18000 rpm,12 min),弃上 清,留絮状沉淀;将絮状沉淀转移至锥形瓶中,用0.1 mol/L 的醋酸溶液(200 mL)振摇促其重新 溶解。 胶原醋酸液在-70较低温冰冻两天。 用一次性注射器戳洞封盖冰冻好的含胶原培养皿保鲜膜,真空冷冻干燥呈干棉花样外观(至少24 准确称取配置3mg/mL 的胶原醋酸液,加入消毒过的搅拌子,冷房搅拌数日得絮状胶原。 10. 胶原蛋白凝胶制备预试- 胶原液:5*DMEM:血清:10*HEPES 液=6:2:1:1,充分混匀; 0.5 NaOH调定pH 值至7.2(综合DMEM颜色变化和pH试纸判断。
如何补充胶原蛋白我们都知道胶原蛋白本身是大分子,不能被我们的肠胃直接吸收,而是会被分解转化为氨基酸,相当于吃进去了普通的蛋白质。只有具备生物活性的小分子胶原蛋白,才能直接渗进小肠黏膜细胞,补充到全身肌肤中。所以,想要吃进去的胶原蛋白能够有美肤**的效果,首先要挑对胶原蛋白。1、口服含胶原蛋白的食物骨肉汤、口服胶原蛋白补品等都属于胶原蛋白食物。但由于会被人的消化系统过滤掉很大一部分,且真正能到达肌肤并起到作用的量非常有限2.直接皮下注射主要用于填充深的皱纹,皮肤损伤造成的缺损(如青春痘疤)和修补脸形的缺陷等。其效果立竿见影,但注射到皮肤内的胶原蛋白会被人体逐渐吸收,因此其功效只能维持半年至一年,而且少数人群可能会出现过敏、传染等副作用。鼠尾型胶原构建与人类自体骨组织化学成分和分子结构相近的仿生骨材料。
胶原的立体结构与一般的球状蛋白质完全不同,每一条亚基形成一股左手旋转的螺旋,其中每 3个氨基酸残基形成一圈螺旋。3 条左手螺旋再扭在一起形成一个右手大螺旋。这样的螺旋称为 3股螺旋。小的甘氨酸残基位于3股螺旋内部。3股螺旋式的棒状胶原分子的大小约是3000×15埃,这些棒状分子首尾相连,并侧向排列形成胶原微丝(其直径可从50埃至数千埃)。胶原分子在两端及沿轴向每隔 680埃的距离存在极性区,这些极性区能和重金属离子结合,使胶原纤维在电子显微镜下形成间距为680埃的明暗相间的特征性的横纹结构。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。可直接或间接参与细胞的附着。昆明正规鼠尾胶原直销价
前庭毛细胞贴附于培养皿底壁,易于封接和长时间(约8h)的观察和记录。珠海鼠尾胶原推荐厂家
鼠尾胶原实验应用:鼠尾胶原为底物的人鼻腔纤毛上皮细胞培养模式的建立目的建立以鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法.方法制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构,应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率.结果鼠尾胶原要平坦均匀,平均厚度约为1mm;HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开;扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形,纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接;同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的;同一来源体外培养的钩突和下鼻甲的纤毛摆动频率是相同的.结论以鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立,为今后研究鼻内用药对纤毛除去功能的影响提供了良好的方法和途径。珠海鼠尾胶原推荐厂家
鼠尾胶原醋酸溶解:1.将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中,制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2.建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3.稀释一定数量的胶原溶液。4.按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克)。石家庄鼠尾胶原单价鼠尾胶原实验应用:探讨应用鼠尾胶原在豚鼠前庭毛细胞膜片钳实验中的促进毛细胞贴壁效...