新常态下细胞冻存指南:细胞冻存技术其重要意义无论怎么估计也不为过。有了高效的冻存复苏技术,我们能把珍贵的样本保存起来建立各种生物样本库,能够建立骨髓库、脐血库挽救生命,当然也能在**发生的时候把样本冻存。细胞冻存技术和我们的日常生活也息息相关。例如IVF 体外受精技术,精子库与胚胎的冷冻,以及脐带血的冻存,都离不细胞开冻存技术。缺点是血清批间差不稳定,导致的每次冻存复苏的效果无法保证,同时也无法应用于多种细胞类型,尤其是娇贵的干细胞,血清成分复杂可能会导致干细胞的分化,不利于后期的实验。因此大多数研究者喜欢商品化的无血清细胞冻存液,商品化的无血清冻存液经过了厂家对多种细胞品系的优化,效果可靠,操作简便。不同的细胞,适合的冻存液也不同,需要根据细胞的类型进行选择。无血清细胞冻存液产品性能:冻存液含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分。开封无血清细胞冻存液厂家批发价
无血清细胞冻存液,通用于人和各种动物细胞株。特别配方(主要成分为DMSO和氨基酸)具有有效提高细胞冻存活率和复苏活力。不含动物来源性蛋白,能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染,确保冻存细胞安全。既适用于一般培养细胞的冻存,也适用于无血清培养细胞和蛋白表达细胞的冻存。产品特色:不含动物源成分,病毒、霉菌和支原体等污染可能性低,各批产品之间有更高的产品质量一致性。成分明确,无批次差异。可直接存放于-80℃冰箱冻存,无需经过费时的程序降温过程(省时、省力、省钱)。独特配方有效提高细胞冻存存活率及复苏率。即用型,无需现配,即开即用。通用型,适用于冻存各种细胞系,原代细胞。可微量,原位冻存,例如杂交瘤细胞的冻存,省时高效。存储条件:储存于4℃以下,质量保障期从产品的生产日期起,为期两年。3个月以上没有使用冻存液计划时,尽可能-20℃冷冻保存。为避免重复冻融过程可能导致的冻存液品质下降和性能降低,推荐将产品分装成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱冻存。温州昆明无血清细胞冻存液无血清细胞冻存液产品性能:为了避免反复冻融,传统的细胞冻存液,分装成小管后置于-20℃环境下保存。
细胞冻存配制含10%DMSO或甘油的细胞冻存液,4℃预冷(新鲜配制的冻存液会产生大量的热);取对数生长期的细胞,用细胞消化酶将单层生长的细胞消化下来;悬浮细胞则直接将细胞收集到离心管中;离心1200rpm,6min;去除上清液,逐渐加入适量预冷的细胞冻存液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中的细胞终浓度为5×10e6/ml~1×10e7/ml;将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5ml;在冻存管上标明细胞的名称、冻存时间及操作人员姓名;冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;到达-80℃时,则可迅速放入液氮中。
细胞冻存注意事项:1.取细胞的过程中注意带好防冻手套,护目镜。此项尤为重要,细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致炸列。2.冻存液的问题:冻存液的配置已是常识,在这里不作详述,但二甲基亚砜(DMSO)对细胞不是完全无毒副作用,在常温下,二甲基亚砜对细胞的毒副作较大,因此,必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢,会造成细胞的损伤,二甲基亚砜(DMSO)选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高,注意加入少量培养液可稀释其浓度,以减少对细胞的损伤。无血清冻存液特性:不需回温,完全即用型。
无血清快速细胞冻存液冻存细胞复苏方法:1、从冰箱里取出细胞冷冻保存管,立即放入37℃振动水浴槽中快速解冻。2、待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入1ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合,再将细胞混合液从冻存管中移入含有9ml该细胞培养基的试管中,混合均匀。3、离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min),移去上清液。4、清洗细胞,充分洗净残留冻存液。5、加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后,将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。6、镜检后,研究者可根据各自方法和需要来进行细胞培养。同时血清中未知成分和细菌等传染物质会给冻存带来影响与风险。深圳无血清细胞冻存液直销厂家
无血清细胞冻存液使用方法:加入适量的无血清型细胞冻存液于离心管中。开封无血清细胞冻存液厂家批发价
细胞冻存液的作用是什么?渗透性冷冻保护剂:可以渗透到细胞内,一般是一些小分子物质,主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。非渗透性冷冻保护剂:不能渗透到细胞内,一般是些大分子物质,主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及Hetastarch等。冷冻保护剂同溶液中的水分子结合,发生水合作用,弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成,同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度,降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度,使细胞免受溶质的损伤。渗透性冷冻保护剂的保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前,渗透到细胞内,在细胞内外产生一定的摩尔浓度,降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度,从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤同时。细胞内水分也不会过分外渗,避免了细胞过分脱水皱缩。开封无血清细胞冻存液厂家批发价
细胞冻存液的操作步骤:1.配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的冻存细胞培养液;2.取对数成长期的体细胞,除去旧细胞培养液,用PBS清理。3.除去PBS,添加适量蛋白酶(遮盖细胞培养皿表层)把单面生长发育的体细胞消化吸收出来;4.抽滤1000rpm,5min;5.除去蛋白酶,添加适量配置好的冻存细胞培养液,用塑料吸管轻轻地吹打使体细胞匀称,记数,调整冻存液中体细胞的较后相对密度为5牙周106/ml~1牙周107/ml;6.将体细胞分装进冻存管中,每管1~1.5ml;7.在冻存管上标出体细胞的名字,冻存时间及作业者;8.冻存:标准的冻存程序流程为减温速度-1~-2℃/min;当温度...