常用总RNA提取试剂:异硫氰酸胍法和Trizol法是动物组织及动物细胞总RNA提取较常用的方法,异硫氰酸胍法操作简单快捷,适用于样本足够大的常规动物组织;Trizol法裂解能力较强,尤其适合小样本及特别难提取的组织,如兔子皮肤,动物结缔组织等总RNA的提取;另外Trizol作为一种通用型的裂解试剂,还可以用于植物组织、细菌、菌类等组织的提取。对于含多糖多酚的植物组织如油茶、茶叶、油菜等还可以使用CTAB法进行总RNA的提取。提取RNA时我们经常遇到的问题是:(1)RNA产量较低;(2)RNA有严重的盐类污染;(3)RNA有严重的有机溶剂污染;(4)样品降解等问题。专门的高盐缓冲系统允许RNA物质基团结合到旋转柱的玻璃纤维基质上,同时使污染物通过柱被有效地洗去。武汉正规RNA提取试剂价格
植物RNA提取:植物组织中,富含酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,或RNase的活性较高。这些物质在细胞裂解后与RNA紧密结合形成难溶复合物或者胶状沉淀,很难将其去除。所以我们在提取植物组织时,要选取针对植物的试剂盒,试剂盒里的裂解液能有效解决多酚易氧化、多糖化合物与核酸分离等难题。1、植物的果皮、果肉、种子、叶片等要在研钵中充分研磨,研磨过程中液氮要及时补充,避免样品融化,研磨后的样品应迅速加入裂解液中震荡混匀,避免RNA降解。2、像水稻及小麦叶片等富含纤维的样本,则应适当减少提取用量,否则组织研磨及裂解不彻底,会使提取的RNA产量较低。3、含水分较多的植物组织例如石榴果实、西瓜果实、桃子果实等则应当适当提高样本量(可选100~200mg)。4、植物组织,如植物叶片、根茎、坚硬的果实等材料一般建议使用液氮在研钵中彻底研钵成份,再继续进行提取步骤。常规的组织匀浆机对植物组织的匀浆效果可能不佳,一般不建议使用。天津RNA提取试剂供应商血浆/血清RNA提取试剂盒:没有DNA和蛋白质的污染,适用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析。
RNA提取浓度不高或质量不佳原因及解决办法:1、得率过低:提取样本过低总量不足或者提取样本过多裂解不彻底;应当使用适当质量的组织或细胞进行提取,样本前处理一定要做好,裂解应充分。2、基因组残留:Trizol法提取时,分层后吸取上清时吸到中间层会带来严重的基因组污染;分层吸取时应当格外小心,不要吸取到中间层。如果是采用柱式法提取,可选择含有DNaseI的试剂盒进行提取,吸附在膜上的核酸直接用DNaseI进行消化,可极大限度的降低DNA残留。
RNA提取试剂注意事项:1、必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品说话,以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。2、TRIReagent含有毒物质苯酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触TRIReagent,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。3、TRIReagent抽提总RNA的同时,理论上也可抽提蛋白和DNA,但未经测试。4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。是基于异硫氰酸胍/苯酚法的一种即用的从细胞和组织中提取总RNA的试剂,在样品裂解或匀浆过程中取出水相,用异丙醇可沉淀回收RNA;中间层用乙醇沉淀可回收DNA;有机相用异丙醇沉淀可回收蛋白。细胞质和细胞核RNA提取试剂盒特点:试剂盒可用于哺乳动物细胞或者组织样品的提取。
超快速多糖多酚植物RNA提取试剂盒专门针对多糖,多酚等难提的植物RNA样本提取设计,适用于棉花,甘薯,番茄,板栗,龙眼,荔枝,葡萄,番茄,龙眼,芒果,草莓,百合,猕猴桃,香蕉,梨,甘蔗,海棠,苹果,石斛,银杏,小麦,羊角吊兰,水稻,玉米牡丹,月季,红豆杉,马铃薯,白松松针,山药,木瓜,吊兰叶片RNA提,水仙花、青花菜、地被菊、梅花、石斛、毛桃、海棠、黑加仑、拟南芥、虎、大豆、草莓、冬青、月季、蔷薇、沙棘、冬枣、芦荟、仙人掌、报春花、唐菖蒲、樱桃、白玉兰、毛白杨、樱花、百合花、紫菜、绿藻苎麻、榛子冬青树,虎仗,黑加仑,黄瓜等农作物,果实,花卉,蔬菜等多糖多酚,色素等次级代谢物严重的植物样本RNA提取。很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。郑州RNA提取试剂
主要取决于离心柱对核酸的吸附能力。武汉正规RNA提取试剂价格
植物RNA快速提取试剂盒:是一种单相RNA快速提取试剂盒,可高效裂解坚固的植物细胞并强烈压制RNA酶活性。细胞破碎之后,植物多糖立即被PlantRNAtrip独特的成分结合。离心抽提步骤将RNA与灭活的RNA酶、蛋白、基因组DNA污染分离,并清理植物多糖多酚以及次生代谢产物。在RNA沉淀之前加入PlantRNAAid清理植物多酚,并清理残余的多糖。提取可在60分钟内完成,所提取的RNA纯度极高,不含DNA和多糖和多酚污染,可用于构建cDNA文库、RT-PCR、Northern转印分析、Poly(A)mRNA纯化、体外翻译、和RNA酶保护实验。适于各种植物组织RNA提取,也特别适合富含糖原的动物肝脏和肌肉组织提取高纯度RNA。如果植物组织富含多酚和次生代谢产物,推荐使用PlantRNAExtractionkit(R1050)。武汉正规RNA提取试剂价格
RNA提取关键点病菌RNA在提取后也仍然具有传染性,在提取时,实验人员需要佩戴口罩和手套等各种防护装备,以防实验室污染。而有种「自动灭活」的方法,在更加便利的同时,也能更好的保护实验人员的安全。许多样品中含有高水平的RNase,这种酶也会加速RNA的降解。为了使这种酶对降解的影响较小化,较好在采集时就稳定好样本中的RNA。这种情况下,可以在裂解缓冲液中立即进行溶解。比如可以通过TRIzol®、RNA裂解缓冲液等使RNase失活,然后再处理样本。另外,再采集样本之后马上加入DNA/RNAShield,可以快速降解掉RNase等蛋白物质。当然,DNA/RNAShield也会保证取样时微生物基因多样...