游离RNA(或称循环RNA,cell-freeRNA,简称cfRNA),即存在于细胞外的转录产物,包括mRNA和RNA,在人的多种体液中被普遍研究并成为疾病无创性诊断和研究的新分子标志物。文献总结了以下两个方面,一方面游离RNA主要来源于tumour细胞,另一方面tumour细胞来源有凋亡、坏死、主动释放三种机制,目前认为以凋亡为主。游离RNA的生物学特征:游离RNA的结构RNA相对DNA而言,更易被普遍存在的核糖核酸酶所降解,而且病症患者血清中含有更高浓度的核糖核酸酶,病症患者血清中以RNA-蛋白脂复合物化学组成来保护RNA,半衰期大约为2天。本试剂盒采用独特的配方和添加剂,能高效的分离血清、血浆及其它无细胞体液等样品中分离出游离的RNA,另外本试剂还可以有效地压制各种外源性和内源性的RNA酶,同时结合特制的纯化柱,能较大限度的保持RNA的完整性、高得率以及纯度,并能保留小RNA,为需要进行小RNA研究,如RNA的用户提供了强有力的工具。RNA提取试剂TRIpure是基于世界上使用较普遍的异硫氰酸胍/酚法研制而成的总RNA抽提试剂。徐州正规RNA提取试剂推荐厂家
动物细胞RNA提取:1、悬浮细胞:可直接离心后弃掉培养基,用无菌PBS清洗1~2遍后,再用适量PBS悬浮起来,然后再加入裂解液进行裂解。千万不要完全弃掉液体后,往沉淀细胞里直接加入裂解液,这样会使外表层的细胞裂解后释放的组蛋白包裹粘附在沉淀细胞外侧,从而限制沉淀内部的细胞与裂解液的接触,从而导致细胞裂解不彻底,降低RNA得率。2、半贴壁或贴壁不紧的细胞:弃掉培养基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取适量PBS用吸管或者泵吹打培养皿,把细胞吹下来,转移到无RNA酶的EP管中,加裂解液进行提取。3、贴壁细胞:需要先用胰酶消化,然后收集到无RNA酶的EP管中,离心去其上清,用PBS洗1~2次,去除多余的胰酶,以适量PBS重悬后继续进行提取步骤。重庆正规RNA提取试剂厂家直销拭子RNA提取试剂的选择?应有较高的提取得率。
病毒RNA提取试剂盒可以快速从全血、血清、血浆、口腔拭子等生物液体中提取病毒RNA。在此试剂盒中,使用了核酸助沉剂--carrierRNA。核酸助沉剂不光有利于微量RNA的沉淀,同时也可以减少RNA的降解。本试剂盒操作简捷方便。30-40min就可以完成一个样品的提取,得到纯净的RNA。RNA可以使用RT-PCR,real-timeqPCR,Northernblot,Dotblot,poly(A)+selection,体外翻译,和分子克隆等实验。此外,裂解液VLS也是病毒RNA样品的一个很好的保存液。储存在裂解液中的病毒RNA(在病毒样品中加入3倍体积裂解液后剧烈涡旋裂解样品)可以在-20℃情况下稳定至2个月;在-80℃情况稳定半年;同时,储存在裂解液中的样品在运输过程中,也可以在4℃稳定一日;-20℃稳定一周。
RNA稳定方法:1.在裂解缓冲液中立即溶解,使RNase失活。然后样品可以立即处理或冷冻保存。2.浸泡在稳定试剂中(如DNA/RNAShield),使核酸酶失活,并在环境温度下长时间保护核酸。这对正在实地收集样本或处理珍贵的病人样本(例如组织活检、全血等)的研究人员特别有帮助。确保样品完全溶解:在RNA提取过程中,较大限度地提高RNA产量和质量的较佳方法是保证样品的完全裂解。然而,并不是所有的样本都对相同的裂解方案敏感。例如,血细胞(如淋巴细胞、PBMCs等)和微生物细胞往往更难以有效地溶解。光光添加基于洗涤剂的裂解缓冲液可能并不总是足够的。为了提高裂解效果,可以将裂解缓冲液与机械裂解步骤(研磨珠破碎)匹配,或者在裂解液上游加入酶裂解步骤(如蛋白酶K、溶菌酶等)。RNA存在于水相中。水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。
通用多糖多酚植物RNA提取试剂盒:1、多糖多酚植物RNA提取试剂盒整合了在提取过程中去除干扰物的技术,已成功用于葡萄,中草药等多糖含量高的样品,成功用于棉花等多酚含量高的样品。另外华越洋还开发了糖类清理剂,PCR压制物清理剂,核酸提取优化剂,样品核酸稳定剂,RNA组织样品保存液等核酸提取辅助产品。2、适用材料普遍:尤其适合解决多醣多酚,色素等次级代谢物丰富的植物样本难题。昆虫RNA柱式提取试剂盒特点:操作简单快速,处理一个样品只需要约十分钟。RNA纯度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。适用于各种昆虫组织,每100mg组织能提取到20~30μg总RNA。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。一站式,提供RNase-free的样品收集管。RNA提取试剂注意事项:如皮肤接触TRIReagent,请立即用大量去垢剂和水冲洗。广州正规RNA提取试剂哪家便宜
RNA 的产量和质量也是另无数人头疼的问题。徐州正规RNA提取试剂推荐厂家
RNA提取试剂的选择:首先,要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用压制RNase的成分,但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键,但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时,使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便,同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外,如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中,可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化,减少实验组间的误差。徐州正规RNA提取试剂推荐厂家
RNA提取关键点病菌RNA在提取后也仍然具有传染性,在提取时,实验人员需要佩戴口罩和手套等各种防护装备,以防实验室污染。而有种「自动灭活」的方法,在更加便利的同时,也能更好的保护实验人员的安全。许多样品中含有高水平的RNase,这种酶也会加速RNA的降解。为了使这种酶对降解的影响较小化,较好在采集时就稳定好样本中的RNA。这种情况下,可以在裂解缓冲液中立即进行溶解。比如可以通过TRIzol®、RNA裂解缓冲液等使RNase失活,然后再处理样本。另外,再采集样本之后马上加入DNA/RNAShield,可以快速降解掉RNase等蛋白物质。当然,DNA/RNAShield也会保证取样时微生物基因多样...