RNA提取浓度不高或质量不佳原因及解决办法:1、得率过低:提取样本过低总量不足或者提取样本过多裂解不彻底;应当使用适当质量的组织或细胞进行提取,样本前处理一定要做好,裂解应充分。2、基因组残留:Trizol法提取时,分层后吸取上清时吸到中间层会带来严重的基因组污染;分层吸取时应当格外小心,不要吸取到中间层。如果是采用柱式法提取,可选择含有DNaseI的试剂盒进行提取,吸附在膜上的核酸直接用DNaseI进行消化,可极大限度的降低DNA残留。在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。珠海RNA提取试剂直销价
植物RNA快速提取试剂盒:是一种单相RNA快速提取试剂盒,可高效裂解坚固的植物细胞并强烈压制RNA酶活性。细胞破碎之后,植物多糖立即被PlantRNAtrip独特的成分结合。离心抽提步骤将RNA与灭活的RNA酶、蛋白、基因组DNA污染分离,并清理植物多糖多酚以及次生代谢产物。在RNA沉淀之前加入PlantRNAAid清理植物多酚,并清理残余的多糖。提取可在60分钟内完成,所提取的RNA纯度极高,不含DNA和多糖和多酚污染,可用于构建cDNA文库、RT-PCR、Northern转印分析、Poly(A)mRNA纯化、体外翻译、和RNA酶保护实验。适于各种植物组织RNA提取,也特别适合富含糖原的动物肝脏和肌肉组织提取高纯度RNA。如果植物组织富含多酚和次生代谢产物,推荐使用PlantRNAExtractionkit(R1050)。金华RNA提取试剂哪里买在裂解液上游加入酶裂解步骤(如蛋白酶 K、溶菌酶等)。
RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些实验方案会推荐,在异丙醇沉淀后,用乙醇沉淀两次。实际上,任何提取实验,都会在纯度和得率这一对矛盾中取舍。醇沉淀会将脂溶性杂质去掉,但部分非脂溶性的杂质依然会连同RNA一起被沉淀下来。因此,多整几次,并不会让RNA的纯度翻倍,反而还会有降低得率的风险。一般情况下,异丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若预计RNA浓度很低,那就只能放弃纯度,在低温沉淀数小时,以换来较高的得率。围绕DEPC的玄学。许多实验方案会推荐使用0.1%DEPC处理RNA相关用水,以灭活RNase。这一点是要肯定的。不过,在使用DEPC的过程中,又充斥着一些玄学。高压灭菌后的DEPC水,会有一股“香甜”的味道。许多人会以为那是残留的DEPC而不敢用。实际上,这只是DEPC分解成CO2和乙醇后,产生的一些挥发性酯类副产物。
提取RNA的详细步骤:首先,将研钵晾干够,倒入1/3体积的液氮,加入0.2g均质的植物材料,充分研磨后转入一个含有300微升GMT的1.5ml的离心管中,摇匀。然后,加入30微升2mol/lNaAc进行摇匀,加入300微升酸酚摇匀,加入100微升的氯仿摇匀。然后,在四摄氏度12000r/min下离心二十分钟,吸取上清液的3/4,加入等体积的异丙醇,于冰上放置十五分钟。然后,在四摄氏度12000r/min下离心十分钟,将沉淀悬浮于含100微升的4mol/lLiCl小试管中,于-20摄氏度下放置过夜。然后,在4摄氏度13000r/min下离心10-15min,将沉淀溶于0.4mlDEPC处理水中,加入1/2体积氯仿和1/2体积酸酚,摇匀,进行抽提,在4摄氏度13000r/min下离心五分钟。将上清液中加入等体积的氯仿摇匀,进行抽提,在四摄氏度13000r/min下离心五分钟,上清液中加入1/10体积3mol/lNaAc和两倍体积的午睡乙醇与-20摄氏度放置一小时。主要取决于离心柱对核酸的吸附能力。
血浆/血清中miRNA提取试剂盒:是专门针对血清、血浆样本中miRNA提取而开发的,利用吸附柱法从血清、血浆样品中简单快捷提取高纯度高质量的miRNA。该试剂盒中的裂解液miRBP1及柱结合液miRBP2具有高效裂解及提取效果。试剂盒中的吸附柱采用特殊的硅基质膜材料,对RNA尤其是smallRNA(<200nt)具有结合能力,与常用的抗凝剂(包括肝素、EDTA、柠檬酸钠、草酸钠)兼容,得到的miRNA可直接用于RT-PCR和Northern杂交等后续分子生物学实验操作。普通植物总RNA提取试剂盒:采用进口硅基质膜制作的总RNA吸附柱,可以从普通植物的根、茎、叶中快速提取总RNA,30~40分钟内即可完成提取过程,提取的总RNA纯度高,没有DNA和蛋白质的污染,适用于RT-PCR、qRT-PCR、芯片分析、Northernblot杂交等实验。总RNA吸附柱保证RNA提取速度快,提取效率高。高效去除植物组织中的色素、酚类等杂质,提取RNA的纯度高,产量大。可以用260nm波长分光测定RNA浓度,OD值为1相当于大约40μg/ml的单链RNA。长沙RNA提取试剂哪家便宜
RNA提取试剂注意事项:尽量不要对着RNA样品说话,以防RNA酶污染。珠海RNA提取试剂直销价
细胞质和细胞核RNA提取试剂盒特点:1.有效分离和提取细胞质RNA,与细胞核RNA。2.方便快捷的离心柱操作方式。3.提取的RNA,品质高,产量多。4.试剂盒不含苯酚,可提取所有RNA(含RNA)。5.纯化的RNA可用于任何应用,包括RT-PCR,qRT-PCR,RNA-Seq,阵列等。6.细胞质RNA不含DNA,可直接用于RT-PCR/qRT-PCR。7.试剂盒可用于哺乳动物细胞或者组织样品的提取。在某些情况下,研究者们更希望能够提取特定分馏的RNA,而不是总RNA。例如,在一些表达谱研究中,较好能够提取成熟的细胞质(Cytoplasmic)RNA。或者,在研究分析未剪接的RNA前体时,提取细胞核(Nuclear)RNA会是一个更好的选择。然而,市面上绝大多数厂家只能为您分别提供2种试剂盒来提取细胞质与细胞核的RNA,不光费用高昂,而且浪费大量的材料与时间。该EpiQuik™总RNA提取试剂盒提供了一种快速,简单,经济有效的方法。珠海RNA提取试剂直销价
RNA提取关键点病菌RNA在提取后也仍然具有传染性,在提取时,实验人员需要佩戴口罩和手套等各种防护装备,以防实验室污染。而有种「自动灭活」的方法,在更加便利的同时,也能更好的保护实验人员的安全。许多样品中含有高水平的RNase,这种酶也会加速RNA的降解。为了使这种酶对降解的影响较小化,较好在采集时就稳定好样本中的RNA。这种情况下,可以在裂解缓冲液中立即进行溶解。比如可以通过TRIzol®、RNA裂解缓冲液等使RNase失活,然后再处理样本。另外,再采集样本之后马上加入DNA/RNAShield,可以快速降解掉RNase等蛋白物质。当然,DNA/RNAShield也会保证取样时微生物基因多样...