外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点,但是效率低,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以普遍普及。聚乙二醇(PEG)可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,早先应用于从血清等样本中收集细菌,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等,因此发表文章时易受质疑。静置10~15分钟,留取沉淀物备用。正规外泌体提取试剂
外泌体研究思路。外泌体研究通常与高通量测序的联系紧密,研究思路可以分为三大类:表达谱、分子标志物和分子机制方向,其中表达谱思路的特点就是短平快、通常以测序数据为主要内容,短平快发表3-5分文章。而分子标志物的特点是在表达谱基础之上加入大量样本验证,建立ROC、KM曲线,分析分子与临床疾病的相关性为主,通常文章影响因子在3-10分之间。分子机制研究,顾名思义要做到细胞功能、机制研究深度,因此工作量通常较大,影响因子通常能够上10+。宁波外泌体提取试剂平均价格同时可获得高纯度和高回收率的外泌体——如新西兰IZON开发的系列的外泌体排阻剂。
外泌体在肺病治病中的作用:目前外科手术仍是肺病治病的较有效方法,但术后复发率很高,而传统放化疗对肺病的治病效果又极其有限。因此,肺病治病的新模式受到广大研究者的关注,已有大量研究证明外泌体在肺病治病中有广阔的应用前景。外泌体作为细胞间通讯的一种形式,在肺病的进程中具有重要作用,因此,控制外泌体的分泌可能成为治病肺病的潜在靶点。据相关报道称,EPI64可以通过启动特异的***和Rab27A来控制A549肺病细胞的外泌体分泌,提示EPI64可以作为治病的潜在靶点。此外,CD9、CD63、HSP90和HSP70在外泌体中富集,从而上调主要组织相容性复合物Ⅱ类分子表达水平,显着促进CD4+T细胞的增殖,通过免疫途径压制一些病症。理论上,所有促进肺病细胞分泌外泌体的机制都可以被用来作为肺病治病的潜在靶点,但目前关于其可行性的研究还比较少。
人尿液来源细胞的外泌体的获取方法,是首先分离培养人尿液来源细胞并收集培养基,将人尿液来源细胞的培养基通过0.22微米滤膜过滤,以去除大的细胞残片以及其它杂质;然后离心除去细胞器,留取上清;再使用可截留100KD分子量的膜,通过离心截留上清中的外泌体,截留完成后,使用PBS对膜进行洗脱即得到外泌体浓缩液;专利申请利用分离培养人尿液来源细胞并收集培养基来进行体外培养,直接把外泌体从尿液中沉降下来,无须分离培养人尿液来源细胞并收集培养基。如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物。
外泌体相关miRNA与肺病的诊断:miRNAs是一类含有20~25个核苷酸的非编码小RNA,能够通过下调或压制靶mRNAs来调节转录水平上的基因表达,目前非编码RNA被普遍发现存在于NSCLC患者外泌体中,参与一些病症的形成和演化过程。单个miRNA可能通过压制性复合物与多个mRNA结合,从而阻滞整个生物通路。因此,外泌体的miRNA具有成为NSCLC标志物的优势。Chen等在152例肺病患者的研究中初次报道了循环游离miRNA的表达,与75例健康者相比,发现了两种高表达的miRNA(miR-25和miR-223)。Rabinonowits等对27例肺病患者和9例健康人的血浆外泌体中12个miRNA的表达进行了评估,结果显示,12个一些病症相关的miRNA*在肺病患者中过度表达。Cazzoli等收集了30个血浆样本,发现4种外泌体miRNA(miR-378a、-379a、-139-5p、-200b-5p)在肺病患者血清中明显升高,用于筛查患者与健康人ROC曲线下面积(AUC)为0.908。同时对超速离心机的设备要求以及操作程序的培训较大提高了提取成本。昆明正规外泌体提取试剂单价
超离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受?欢迎,但过程比较费时,且回收率不稳定,纯度也受到质疑。正规外泌体提取试剂
所有的细胞都能分泌外泌体,但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量上还是在内含物中都具有很大的差异性,这也决定了每种外泌体所行使的功能不一样。外泌体普遍参与细胞间物质运输与信息传递,调控细胞生理活动。同时,外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进一些病症发生和转移等作用;此外,外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。外泌体相关数据库有哪些?lexoRBase数据库收集和描述人类血液外泌体中所有长的RNA,包括circRNA、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia数据库汇总了不同囊泡研究中发现的蛋白、mRNA、miRNA、脂类等信息。lExoCarta数据库主要收录了包括人、大鼠、小鼠、绵羊等几个物种的286个研究结果,涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂类等信息。正规外泌体提取试剂
当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而启动靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而启动细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。外泌体(Exosome)发现...