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液相色谱系统基本参数
  • 品牌
  • 赛默飞世尔
  • 型号
  • 齐全
液相色谱系统企业商机

正反色谱


正相色谱法

采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等)。

反相色谱法

一般用非极性固定相(如C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、**、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用**为***,据统计,它占整个HPLC应用的80%左右。


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高效液相色谱法有“四高一广”的特点:


①高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。

②高速:分析速度快、载液流速快,较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时。

③高效:分离效能高。可选择固定相和流动相以达到比较好分离效果,比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

④高灵敏度:紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。

⑤应用范围广:百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析,显示出优势。

⑥柱子可反复使用:用一根柱子可分离不同化合物

⑦样品量少、容易回收:样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。



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高效液相色谱分离原理


离子对

(Ion Pair Chromatography)

离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子 ) 加到流动相或固定相中,使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物,从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示:X水相Y-水相 === X Y-有机相

式中:X 水相--流动相中待分离的有机离子(也可是阳离子);Y-水相--流动相中带相反电荷的离子对(如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等);X Y---形成的离子对化合物。

当达平衡时:

KXY = [X Y-]有机相/[ X ]水相[Y-]水相

根据定义,分配系数为:

DX= [X Y-]有机相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相

[讨论:DX与保留值的关系]

离子对色谱法(特别是反相)解决了以往难以分离的混合物的分离问题,诸如酸、碱和离子、非离子混合物,特别是一些生化试样如核酸、核苷、生物碱以及药物等分离。




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