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高效液相色谱分离原理

离子交换

(Ion-exchange Chromatography)

IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流

动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下：

X-（溶剂中） (树脂-R4N Cl-)=== （树脂-R4N X-) Cl- （溶剂中）

当交换达平衡时：

KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-]

分配系数为：

DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-]

[讨论：DX与保留值的关系]

凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。

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高效液相色谱分离原理

液-液分配

(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于高效液相色谱计算公式：

式中，cs—溶质在固定相中浓度；cm—溶质在流动相中的浓度； Vs—固定相的体积；Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。

a.正相液-液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性。

b.反相液-液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性。

c.液-液分配色谱法的缺点：尽管流动相与固定相的极性要求完全不同，但固定液在流动相中仍有微量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失。上世纪70年代末发展的化学键合固定相（见后），可克服上述缺点。

赛默飞世尔Vanquish液相色谱系统咨询报价低扩散性的10 mm 和 60 mm流通池可以为特定的应用提供极高的灵敏度和极宽的线性。

液相色谱理论

发展简况

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。

高效液相色谱相关术语

色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：

前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少见。

峰底—基线上峰的起点至终点的距离。

峰高(peak height，h)—峰的比较高点至峰底的距离。

峰宽（peak width，W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ

半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半处的峰宽。Wh/2=2.355σ

该系统应用灵活，性能***，分离可靠，满足实验室的需求，适用于从高通量分析到药品质控分析的方法开发。

反梯度应用 Vanquish Duo 系统

提高定量分析水平，获取更多未知化合物信息

反梯度的 Vanquish Duo 系统可通过电雾式检测技术（CAD）为所有检测分析物提供一致的响应。等度分离可产生一致的 CAD 响应，但某些分离需要采用梯度洗脱导致相应不一致。Vanquish Duo系统通过使用第二个泵对检测器输送反向梯度，可实现：

• 采用 CAD 检测器在梯度洗脱条件下获得一致的响应

• 在无标准品的情况下，可靠地定量已知和未知化合物

• 通过自动反梯度计算功能考查所有系统体积，简化了方法设置

无论化合物何时在梯度中进行洗脱，进入检测器的洗脱液通过反梯度补偿功能，始终保持相同的溶剂组成。即使缺乏特定化合物的单个标准品，也能够可靠地为您提供一致的定量响应信息。

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温度范围从 5°C 至 120°C，主动预加热。上海赛默飞世尔Vanquish高效液相色谱系统优惠价格

高效液相色谱的应用

高效液相色谱应用非常***，几乎遍及定量定性分析的各个领域。

(1)分离混合物

高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。

通过与试样预处理技术相配合，高效液相色谱法所达到的高分辨率和高灵敏度，可分离并同时测定性质上十分相近的物质，能够分离复杂混合物中的微量成分。并且随着固定相的发展，还可在充分保持生化物质活性的条件下完成对其的分离。

(2)生化分析

由于高效液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域，并已成为解决生化分析问题**有前途的方法。

(3)仪器联用

高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。高效液相色谱一质谱联用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等：高效液相色谱一红外光谱联用也发展很快，如在环境污染分析测定水中的烃类等．使环境污染分析得到新的发展。 上海赛默飞世尔Vanquish高效液相色谱系统优惠价格

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