医院检验中心糖原染色操作规程:1.雪夫氏试剂:400m1 蒸馏水煮沸除去 C02,逐渐加碱性 品红 2.08 溶解后,待冷却至 60℃,加 1mm01 儿 HCl40ml, 再加偏重亚硫酸钠(NaHSO:)4g,次日加活性碳 1.5g, 放置半天后过滤。配好后液体为无色透明,保存于 4℃ 冰箱中。 2.过碘酸作用液:过碘酸 1g 溶于蒸馏水 100ml 中,或取 过碘酸钾(1tI04)0。698 加蒸馏水 100ml,微加热使溶 解,再加浓硝酸 0.3m1,置冰箱中保存。 3.固定液:95%乙醇 90ml 与甲醛 10m1 混匀。 4.20g/l 甲基绿:甲基绿 2g 溶于 100m1 蒸馏水。 [操作] _x000c_(1) 新鲜或陈旧血片、骨髓片于固定液内 10 分钟。 (2) 水洗数次后,对照片先用唾液消化 30 分钟,也可在 同一片,在其中间用蜡笔划界,一半做对照,另一半做 测定。 (3) 水洗后,滴加过碘酸数滴于涂片上,作用 10 分钟后, 再水洗数次。植物材料在选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分。江西品质好的糖原染色试剂盒哪里买
糖原染色的参考值及临床意义:1.慢性淋巴细胞白血病、淋巴肉瘤等恶性淋巴细胞增生性疾病,其淋巴细胞的PSA染色积分值增高;等淋巴细胞良性增生时,淋巴细胞积分值正常。医|学教育网搜集整理故该试验可用于鉴别良性与恶性淋巴细胞增生性疾病。2.红白血病时幼红细胞的PAS染色呈强阳性反应,积分值增高;溶血性贫血及巨幼细胞性贫血时,幼红细胞的PAS染色积分值在正常范围内,故该试验也可用于红白血病的诊断及鉴别幼红细胞增多的性质。3.急性粒细胞白血病时,原始及幼稚粒细胞PAS染色常呈阴性反应;急性淋巴细胞白血病时,原始及幼稚淋巴细胞常呈阳性反应;急性单核细胞白血病时,原始及幼稚单核细胞多呈强阳性反应。 故PAS染色有助于三种急性白血病类型的鉴别。江西品质好的糖原染色试剂盒哪里买较大增强了染色效果;性能稳定,特异性强;操作简捷,*需1h左右。
可以通过pas染色计算糖原含量吗:PAS染色又称过碘酸雪夫染色,糖原染色.一般用来显示糖元和其它多糖物质. 具体现象例举:阳性反应,胞浆呈红色,阴性反应,胞浆呈无色;在正常血片中RBC不染色; PLT染成深红色;中性粒细胞胞浆染成红色或深红色,有些细胞有阳性颗粒;单核细胞的胞浆染成淡红色,可含有细小或粗大阳性颗粒;少数淋巴细胞的胞浆内含有少许小的淡红色或红色颗粒;正常骨髓的幼稚细胞和有核RBC都不染色;巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色. 巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色. 颜色深浅与浓度相关。
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一,McManus在1946年较先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖,该染色试剂盒不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基,使之变为二醛,醛不Schiff试剂能结合成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于过氧化,这是很关键的步骤。PAS技术是很少可检测不同种类的黏液物质(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技术却不能区别黏蛋白和糖原。若要冸确鉴别黏液物质(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步骤。大多数情冴下可用α–淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解,形成水溶性的双糖-麦芽糖,在应用PAS技术之前将糖原从组织切片上除去。人类的唾液被认为是消化糖原的一种有效手段,但是出于安全以及缺乏标冸唾液的考虑,不主张应用唾液。过碘酸氧化时间不宜过久,氧化时的温度以18~22℃佳。
糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蜡切片脱蜡至水。(2) 0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液(过碘酸再结晶应重新配制使用)。(3)蒸馏水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分钟。(Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用)(5)流水冲洗10分钟。(6)苏木素浸染细胞核2-3分钟。(7)脱水、透明、封盖。结果:糖原呈红色,细胞核呈蓝色。试剂 配制:(1)0. 5%过碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏 试剂 。碱性品红 1g蒸馏 水 200ml1N盐酸(98.3ml比重1.16盐酸,加入 蒸馏 水成1000ml) 20ml偏重亚硫酸钠或钾 1g碱性品红1g加入200ml蒸馏水,搅拌加热沸腾,待冷却至50℃过滤,加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处,两天后溶液变桔黄色或草黄色,然后加入少量活性碳并震荡、过滤,此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。天津哪家提供糖原染色试剂盒报价
该依据切片厚薄、组织的类别等决定。江西品质好的糖原染色试剂盒哪里买
糖原及粘液染色法注意事项:1、 糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。2、如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病,因无水酒精渗透较慢,而且容易产生极化,(极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果较佳,其配法如下:苦味酸饱和于95%酒精85ml40%甲醛 10ml冰醋酸 5ml3、各种试剂必须化学纯,亚硫酸钠须有浓厚气味,器皿必须洁净而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏试剂,在经过活性碳吸附漂白后不显无色,首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓,使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身,常常虽属同一生产厂家,但不同批号,其效果就可能不同,应特别引起注意。江西品质好的糖原染色试剂盒哪里买
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注意事项:染色前:①切出的石蜡切片要好,不能有皱褶或者刀痕,切片不能太厚。②捞片时,较好一张玻片捞一个组织,组织较好位于玻片的中间,美观的同时也利于脱蜡(有时二甲苯的液面低于组织片的时候,达不到脱蜡的目的)。③石蜡切片脱蜡到水时,一定要注意组织切片脱蜡务必要彻底(脱蜡时间不能太少)以使脱蜡后的组织达到真正的“干净”。否则剩余的未脱干净的石蜡粘附在组织表面,在染色时染色液未能充分与组织接触,较终导致染色效果不佳,甚至染不上颜色。④在染色过程中较好不要在玻片上贴标签纸,以避免脱蜡时把标签纸也浸没,致使标签纸上的胶黏到玻片上,造成染色不佳。取材必须新鲜,这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要。浙江糖原...