糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蜡切片脱蜡至水。(2) 0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液(过碘酸再结晶应重新配制使用)。(3)蒸馏水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分钟。(Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用)(5)流水冲洗10分钟。(6)苏木素浸染细胞核2-3分钟。(7)脱水、透明、封盖。结果:糖原呈红色,细胞核呈蓝色。试剂 配制:(1)0. 5%过碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏 试剂 。碱性品红 1g蒸馏 水 200ml1N盐酸(98.3ml比重1.16盐酸,加入 蒸馏 水成1000ml) 20ml偏重亚硫酸钠或钾 1g碱性品红1g加入200ml蒸馏水,搅拌加热沸腾,待冷却至50℃过滤,加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处,两天后溶液变桔黄色或草黄色,然后加入少量活性碳并震荡、过滤,此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。自早幼粒阶段以后的粒细胞和幼单核细胞可呈弱阳性反应。浙江如何使用糖原染色试剂盒直销价
医院检验中心糖原染色操作规程:1.雪夫氏试剂:400m1 蒸馏水煮沸除去 C02,逐渐加碱性 品红 2.08 溶解后,待冷却至 60℃,加 1mm01 儿 HCl40ml, 再加偏重亚硫酸钠(NaHSO:)4g,次日加活性碳 1.5g, 放置半天后过滤。配好后液体为无色透明,保存于 4℃ 冰箱中。 2.过碘酸作用液:过碘酸 1g 溶于蒸馏水 100ml 中,或取 过碘酸钾(1tI04)0。698 加蒸馏水 100ml,微加热使溶 解,再加浓硝酸 0.3m1,置冰箱中保存。 3.固定液:95%乙醇 90ml 与甲醛 10m1 混匀。 4.20g/l 甲基绿:甲基绿 2g 溶于 100m1 蒸馏水。 [操作] _x000c_(1) 新鲜或陈旧血片、骨髓片于固定液内 10 分钟。 (2) 水洗数次后,对照片先用唾液消化 30 分钟,也可在 同一片,在其中间用蜡笔划界,一半做对照,另一半做 测定。 (3) 水洗后,滴加过碘酸数滴于涂片上,作用 10 分钟后, 再水洗数次。浙江咨询糖原染色试剂盒哪里买如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病。
糖原染色在使用过程中需要注意以下几个方面:尽可能选取小块新鲜组织及时固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前决不能用水或生理盐水等浸洗。应避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能较好地保存糖原,但有使糖原流动到细胞一侧的现象,多数人认为是由于固定剂把细胞内的糖原推向固定剂对组织浸透的方向而造成。其他组织应用中性福尔马林固定为佳。组织在4℃左右温度内固定与保存,是针对糖的性质和避免糖原溶于水而采取的相应措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此较好不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳。
注意事项:染色前:①切出的石蜡切片要好,不能有皱褶或者刀痕,切片不能太厚。②捞片时,较好一张玻片捞一个组织,组织较好位于玻片的中间,美观的同时也利于脱蜡(有时二甲苯的液面低于组织片的时候,达不到脱蜡的目的)。③石蜡切片脱蜡到水时,一定要注意组织切片脱蜡务必要彻底(脱蜡时间不能太少)以使脱蜡后的组织达到真正的“干净”。否则剩余的未脱干净的石蜡粘附在组织表面,在染色时染色液未能充分与组织接触,较终导致染色效果不佳,甚至染不上颜色。④在染色过程中较好不要在玻片上贴标签纸,以避免脱蜡时把标签纸也浸没,致使标签纸上的胶黏到玻片上,造成染色不佳。糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。
糖原染色在使用过程中需要注意以下几个方面:Schiff氏染液的配制是关键,尤其是偏重亚硫酸钠的质量,打开应是粉剂,且带有硫的气味,若成团或没有气味,则不能用,配制时使用的容器、药勺、称药天平与称药纸等必须洁净、无污染。新配制好的Schiff剂为无色透明液体[1],配好后可分成小份置于-20℃保存,用时取一份恢复到室温即可。沈洪武等通过对比染色发现,冷冻保存1年的Schiff液的染色结果与新鲜配制的染色结果一致[5]。0.5%~1%高碘酸(pH值在3.0~5.0之间),环境温度以不高于20℃为宜,室温高时氧化时间适当缩短;如果染色时环境温度较高且高碘酸作用时间长,可使某些物质成分发生非特异反应,使染色结果出现假阳性。因此,室温较高时可适当缩短反应时间。故PAS染色有助于三种急性白血病类型的鉴别。山东正规糖原染色试剂盒销售厂家
一般厚度不超过3mm,大小不超过5×5m㎡。浙江如何使用糖原染色试剂盒直销价
糖原D-PAS染色液:使用方法:1、两张相同切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇入水。2、一张切片入37℃淀粉酶溶液处理1h。另一张不用淀粉酶溶液处理,入水中1h作为对照。3、流水冲洗两张切片各5~10min。4、入过碘酸溶液,室温放置5~8min,一般不宜超过10min。5、自来水冲洗1次,再用蒸馏水浸洗2次。6、入Schiff Reagent,置于室温阴暗处浸染10~20min。7、自来水冲洗10min。8、入Mayer苏木素染色液,染细胞核1~2min。9、(可选)酸性乙醇分化液分化2~5s。10、自来水冲洗10~15min,更换蒸馏水清洗使其返蓝。11、二甲苯透明,中性树胶封固。浙江如何使用糖原染色试剂盒直销价
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注意事项:染色前:①切出的石蜡切片要好,不能有皱褶或者刀痕,切片不能太厚。②捞片时,较好一张玻片捞一个组织,组织较好位于玻片的中间,美观的同时也利于脱蜡(有时二甲苯的液面低于组织片的时候,达不到脱蜡的目的)。③石蜡切片脱蜡到水时,一定要注意组织切片脱蜡务必要彻底(脱蜡时间不能太少)以使脱蜡后的组织达到真正的“干净”。否则剩余的未脱干净的石蜡粘附在组织表面,在染色时染色液未能充分与组织接触,较终导致染色效果不佳,甚至染不上颜色。④在染色过程中较好不要在玻片上贴标签纸,以避免脱蜡时把标签纸也浸没,致使标签纸上的胶黏到玻片上,造成染色不佳。取材必须新鲜,这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要。浙江糖原...