糖类染色实验——糖原染色:高碘酸氧化液:高碘酸 0.5 g,蒸馏水 100 ml。此液溶解后放入冰箱中待用。Schiff 染色液:碱性复红 1 g,1mol/L 盐酸 20 ml,焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)2 g,双重蒸馏水 200 ml。先将 200 ml 双重蒸馏水煮沸,稍有火焰,加入 1 g 碱性复红,再煮沸 1 min,冷却至 50℃ 加入 20 ml1mol/L 盐酸,待 35℃ 时加入 2 g 焦亚硫酸钠。室温中 2 h 之后见稍带红色,5 h 之后变为无色液体。棕色瓶内装好,放入冰箱中保存待用。1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。2. 蒸馏水洗 2 次。3. 高碘酸氧化液处理 10~20 min。4. 充分蒸馏水洗。5. Shciff 液染色,染色 10~20 min(如果室温在 15℃ 以下时,可在湿盒内加入温水而加快反应)。6. 流水冲洗 3 min(对于着色较深的切片可适当缩短时间)。7. 用 Mayer 明矾-苏木**染细胞核 3~5 min。8. 0.5% 盐酸乙醇液分化 30s,自来水浸洗 2 min。如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病。山东正规糖原染色试剂盒生产厂家
PAS染色的临床意义①帮助鉴别不典型巨核细胞和霍奇金细胞或Reed-Sternberg细胞,前者呈强阳性反应,后者呈弱阳性或阴性反应。②帮助鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞,前者呈强阳性反应,后者呈弱阳性反应,且空泡中心为阴性反应。③帮助鉴别白血病细胞和腺骨髓转移的腺细胞,后者呈强阳性反应,阳性反应物质为红色细颗粒状或粗颗粒状,有时呈红色块状。白细胞系统:急性淋巴细胞白血病时白血病性原始淋巴细胞的阳性反应物质为红色粗颗粒状或红色块状,底色不红;急性粒细胞白血病时,白血病性原始粒细胞的阳性反应物质呈均匀分布的红色细颗粒状或呈均匀红色;急性单核细胞白血病时,白血病性原始单核细胞的阳性反应物质呈红色细颗粒状,弥散分布,有时在胞浆的边缘处颗粒较粗大。山东正规糖原染色试剂盒厂家现货糖类从组织化学技术角度来分,可分为多糖、中性粘液物质。
糖原染色(过碘酸-雪夫反应) 原理 多糖中乙二醇基 经过碘酸氧化成二醛基与无色品红结合, 形成紫红色化合物。沉积于含糖原的胞浆中。结果:胞浆中出现弥散状,颗粒状,块状红色为阳性。 无红色颗粒为阴性 _x000c_临床意义 1、正常血细胞的染色反应 粒系:原粒细胞糖原含量很低,随着细胞的分化成熟,糖原含 量逐增加,至成熟阶段糖原含量十分丰富。 淋巴细胞:糖原常凝聚成颗粒或块状。巨核细胞-血小板系统:PAS反应呈粗大的紫色颗粒或团块。 正常红系:阴性。对疾病诊断的意义白血病类型的鉴别: 急性粒细胞白血病:原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应,以弥 散性为主; 急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞多呈粗颗粒、块状阳性反应。
糖原染色临床意义:1、急性淋巴细胞白血病、淋巴组织恶性增生性疾病、红白血病、戈谢病的原始细胞呈强阳性反应或阳性反应;缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍、骨髓增生异常综合征亦可呈阳性反应;急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、良性淋巴细胞增多症、尼曼-皮克细胞呈阴性反应或弱阳性反应。巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等,幼红细胞为阴性反应。偶有个别幼红细胞呈阳性反应。2、帮助鉴别不典型巨核细胞和霍奇金细胞,巨核细胞呈强阳性反应;霍奇金细胞呈弱阳性或阴性反应。3、帮助鉴别白血病细胞和腺骨髓转移的腺细胞,腺细胞呈阳性反应。冷冻切片染色效果不佳,成熟时间2个月,染色时间一般15-20分钟。
糖原染色(PAS):(1)原理:过碘酸将血细胞内的糖原氧化,生成醛基。醛基与雪夫液中的无色品红结合,形成紫色化合物,定位于细胞质中。(2)操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分钟,流水冲洗,晾干。滴加过碘酸溶液作用20分钟,流水冲洗,晾干。滴加雪夫液作用60分钟,流水冲洗,晾干。滴加甲基绿溶液复染10分钟,流水冲洗,晾干镜检。(4)临床意义:根据染色阳性程度和阳性物形态鉴别主要用于急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病鉴别,还有助于红白血病与巨幼细胞贫血和溶血性贫血的鉴别诊断。过碘酸溶液和苏木素溶液浓度更低,不宜过染。山东正规糖原染色试剂盒厂家现货
糖尿病性肾小球硬化症或血管病的诊断。山东正规糖原染色试剂盒生产厂家
染色的一般原则:因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用凋亡诱导处理的细胞做单阳对照,进行荧光补偿的调节。标记抗体常用荧光素 FITC,EGFP激发光:488nm发射光:525nm;使用面较广,价格便宜。PE激发光488nm 发射光575nm,此荧光的激发效率较佳,故此荧光得到的信号较强;检测某些弱表达的抗原,推荐使用此荧光素。价格较FITC昂贵。APC激发光633nm, 发射光660nm,在配有双激光的流式细胞仪上,此荧光染料可与7-AAD或PI共同使用来避开自带绿色荧光的样本。流式细胞仪相关试剂盒。山东正规糖原染色试剂盒生产厂家
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注意事项:染色前:①切出的石蜡切片要好,不能有皱褶或者刀痕,切片不能太厚。②捞片时,较好一张玻片捞一个组织,组织较好位于玻片的中间,美观的同时也利于脱蜡(有时二甲苯的液面低于组织片的时候,达不到脱蜡的目的)。③石蜡切片脱蜡到水时,一定要注意组织切片脱蜡务必要彻底(脱蜡时间不能太少)以使脱蜡后的组织达到真正的“干净”。否则剩余的未脱干净的石蜡粘附在组织表面,在染色时染色液未能充分与组织接触,较终导致染色效果不佳,甚至染不上颜色。④在染色过程中较好不要在玻片上贴标签纸,以避免脱蜡时把标签纸也浸没,致使标签纸上的胶黏到玻片上,造成染色不佳。取材必须新鲜,这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要。浙江糖原...