芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测我们的方法利用了亚飞克尔反应室阵列(图1C)我们称之为单分子阵列(SiMoA)——可以分离和检测单个酶分子20-24。这种方法借鉴了Walt等人20-23的工作阵列用于研究单个酶的动力学和抑制作用。我们的目标是利用捕获和检测单个酶的能力来检测用酶标记的单个蛋白质分子。在这个单分子免疫测定的第一步(图1A),在微球(直径μm)上形成一个三明治抗体复合物,结合的复合物用酶标记,如同常规的基于微球的ELISA。当测定含有极低浓度蛋白质的样品,蛋白质的比值分子(以及由此产生的酶标记复合物)与微球的比例很小(通常小于1:1),因此含有标记免疫复合物的微球百分比遵循泊松分布,导致单个微球上存在单一免疫复合物。例如,如果在(3000个分子)的蛋白质中捕获并标记了50μM的蛋白质,并且在200,000个微球上进行标记,则珠子,然后,。无法检测到这些低数量的酶使用标准检测技术(例如,平板阅读器)的标签,因为荧光染料由每种酶生成的产物扩散到一个大卵试验体积(通常为),并进入其中需要数十万种酶标签才能产生高于该水平的荧光信号背景。芯弃疾JX-8B单分子ELISA检测产品,微量样本可同时测2-4个指标;!医疗检测用数字ELISA特点
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由于活性珠子的百分比接近50%(酶与微球的比例大于~1:1.5),然而,使用图像分析软件区分“开启”和“关闭”孔变得具有挑战性,我们达到了数字动态范围的实际上限。例如,图2中7fM(~45%活性)的信号偏离了线性。因此,这里使用50,000个孔展示的数字线性动态范围是从3.5fM到350zM,即大约四个对数单位。前提是蛋白质使用适当的酶浓度进行标记,这种动态范围对于许多临床应用来说是足够的 阵列单分子数字ELISA准确宽超多重检测芯片在普查中筛选高特异性标记物组合,提升早期诊断准确性。
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人类形式的蛋白质被加入到25%牛血清中以代替临床测试样本;通常使用四倍稀释因子以减少免疫测定中的基质效应4。使用数字ELISA检测25%血清中的PSA,从该实验中确定了LOD为~50aM(1.5fg/mL),相当于整个血清中的LOD为~200aM(6fg/mL)。检测到的比较低浓度为250aM,相当于25%血清中的1fMin全血清。由于LOD是通过外推背景浓度来确定的加上背景的三个标准差,不同运行的LOD取决于背景的CV。在具有典型背景方差的几个实验中,全血清PSA的亚飞摩尔LOD得以保持。相比之下,一种前列的商业PSA检测方法(ADVIACentaur,西门子)报告在人血清中的LOD为3pM(0.1ng/mL),并且已经报道了LOD在10-30fM17,26。
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单分子酶检测到的比较低酶分子数假设蛋白质检测分析的更终灵敏度为背景信号可能由非特异性相互作用产生。为了评估内在敏感性,我们通过将400,000个带有生物素的珠子与不同浓度的酶缀合物链霉亲和素-阝-半乳糖苷酶(S阝G)混合,创建了具有明确酶与珠子比例的珠子群体。为了方便起见,生物素化珠子是通过将生物素化DNA与功能化的珠子杂交提供的。互补DNA。[我们注意到,该实验不应被视为敏感的DNA检测;该检测的敏感性受到非特异性相互作用的限制,如补充图2所示,这些相互作用发生在酶缀合物和表面结合的DNA之间。 全自动加样与图像分析系统实现检测流程自动化,荧光信号识别,结果可靠。
磁珠阵列化反应的信号处理优势:磁珠阵列化反应作为数字ELISA芯片的**环节,通过量子点标记与荧光共振能量转移(FRET)技术,实现信号的指数级放大。在IL-6检测中,每个磁珠捕获的抗原-抗体复合物携带多个量子点,单个荧光事件的信号强度较传统ELISA提升10倍以上,使0.5pg/ml的低浓度样本仍能产生***的荧光响应。信号处理软件通过多视场拼接与背景噪声扣除算法,进一步提升信噪比,确保弱阳性样本的准确识别。这种“信号放大+智能处理”的双重机制,使芯片在接近检测极限的浓度区间仍能保持良好的线性关系,为临界值样本的精细判断提供了技术保障。芯弃疾JX-8B单分子小型化ELISA检测产品,每个医学实验室都能用的单分子检测;医疗检测用数字ELISA微量试剂
芯弃疾单分子ELISA检测盒,使用灵活开放,少于8孔即可测试,可使用客户自研各用试剂!医疗检测用数字ELISA特点
微量样本超多重检测芯片:亚pg级灵敏度与高通量的协同创新,微量样本超多重检测芯片突破传统技术限制,单通道**多设计21个检测区,单个芯片并联8-16个**通道,检测速度达288-336测试/小时,性能媲美化学发光技术,灵敏度达亚pg级别。其“省样本、省耗材、省空间”优势***:5μl微量进样适配稀缺样本,21项指标共享一套耗材降低成本,桌面式扫描仪节省实验室空间。在**普查中,该芯片可同时筛查29种肺*标记物,筛选特异性>80%的组合(如CEA、SA、CA242),提高早期诊断准确性;在炎症因子检测中,对IL-1β、IL-6等低丰度细胞因子的检测线性范围宽泛,为疾病早期***筛查提供了高效解决方案,尤其适合大规模流行病学调查与个体化医疗中的多因子分析。医疗检测用数字ELISA特点