双光子显微镜是一种先进的成像技术，可以在保持细胞活性的情况下，对深层组织进行高分辨率成像。它主要用于生物学、医学和材料科学等领域的研究。双光子显微镜的重心技术是基于双光子激发的荧光成像。当激光通过样品时，它会吸收特定波长的光子，然后发出荧光。双光子显微镜使用两个连续的光子同时激发样品，这样可以在保持样品完整性的同时，获得高质量的图像。双光子显微镜具有以下优点：1.高分辨率：由于双光子激发的特性，它可以获得比传统显微镜更高的分辨率。2.深层成像：由于激光的穿透深度限制，传统的光学显微镜无法对深层组织进行成像。而双光子显微镜可以解决这个问题，因为它可以激发样品的深层荧光。3.活细胞成像：双光子显微镜可以在保持细胞活性的情况下进行成像，这对于研究细胞生理学和生物化学过程非常有用。4.多模式成像：双光子显微镜可以结合多种技术，如光谱成像、钙离子成像和神经活动成像等，以提供更丰富的生物样品信息。总之，双光子显微镜是一种强大的研究工具，可以对深层组织和活细胞进行无损成像。这使得它在生物学、医学和材料科学等领域的研究中具有广泛的应用。双光子显微镜除了可以进行厚的组织样品拍摄以外呢，可以在小鼠的的任何部位进行成像。双光子显微镜作用
WinfriedDenk使用的第1个光源是染料飞秒激光(脉冲宽度100fs，可见光波长630nm)。染料激光虽然实验室演示可以接受，但是使用起来不方便，所以离商业化还很远。很快双光子显微镜的标准光源变成了飞秒钛宝石激光器。钛宝石激光器除了具有固态光源的优点外，还具有近红外波长调谐范围宽，而近红外比可见光穿透更深，对生物样品的损伤更小。下图是Thorlabs的双光子和三光子显微镜配置，钛宝石飞秒可调谐激光器位于平台左侧。从双光子到三光子科学家们正在从双光子显微镜转向三光子显微镜。1996年，ChrisXu在康奈尔大学(Denk的导师实验室)读博时发明了三光子显微镜。如果双光子吸收是可行的，那么三光子似乎是自然的发展方向。三光子成像使用更长的波长，大约1.3和1.7微米，成像深度比双光子更深。目前录音大约2.2毫米，人的大脑皮层厚度大约4毫米。与双光子显微镜相比，三光子需要使用更强、更短、重复率更低的激光脉冲，这是传统的钛宝石激光器很难满足的，但对于掺镱光纤飞秒光参量放大器，比如我们的Y-Fi光参量放大器(OPA)就非常容易。国外ultima双光子显微镜双光子显微镜厂家就找滔博生物。
与普通显微镜相比，电子显微镜可以在更小的尺度上观察事物，冷冻电子显微镜可以观察活性生物大分子。双光子显微镜有什么优势？它能做普通光学显微镜做不到的事情吗？原来双光子显微镜可以准确穿透厚标本进行定点和***观察！因为电磁波的波长越短，粒子越强，散射的影响越大。双光子显微镜将激发光源改为长波长激光，增加了激光的穿透力，同时降低了对细胞的毒性。此外，由于双光子激发效应只能发生在物镜的焦点处，因此扫描精度极高，还可以提高激发光效率，减少扫描点以外的荧光物质的消耗。
掺杂可以明显影响碳点（CDs）的发射和激发特性，使双光子碳点（TP-CDs）具有本征双光子激发特性和605nm的红光发射特性。在638nm激光照射下，除了长波激发和发射外，还可以实现活性氧（ROS）的产生，这为光动力技术提供了巨大的可能性。更重要的是，通过各种表征和理论模拟证实，掺杂诱导的N杂环在TP-CDs与RNA的亲和力中起关键作用。这种亲和力不仅为实现核仁特异性自我靶向提供了可能，而且通过ROS断裂RNA链解离TP-CDs@RNA复合物，赋予治疗过程中的荧光变异。TP-CDs结合了ROS的产生能力、光动力疗法（PDT）过程中的荧光变化、长波激发和发射特性以及核仁的特异性自靶向性，可以认为是一种结合核仁动态变化实时处理的智能CDs。双光子显微镜使用的是高能量锁模脉冲器。
双光子技术在医学诊断方面有着巨大的应用潜力。这方面没有标准和体系，需要系统的医学研究和庞大的医学数据支撑。通过基于多光子成像技术研究细胞结构、生化成分、微环境、组织形态、代谢功能的影响信息，可以发现与细胞学、分子生物学、组织病理学、疾病的诊断和特征的关系。共同探索生理病理基础和分子细胞生物学机制，筛选皮肤病、自身免疫性疾病等疑难疾病的识别、诊断和鉴别诊断依据，建立全新完整的多光子细胞诊断数据库，明确不同疾病的多光子临床检测设备产品标准。在讨论环节，来自病理科、呼吸中心、心内科、神经内科、皮肤科、研究所的多位医生和科研人员结合各自的工作领域，与王爱民副教授进行了热烈的讨论。其中，毛发中心杨顶权主任拟再次邀请王爱民副教授进行学术交流。通过此次学术交流，病理学系和研究所分别与王爱民副教授课题组达成了初步合作意向。由于其非侵入性和高分辨率的特点，双光子显微镜成为了研究神经科学、ai症研究、免疫学等领域的重要工具。国外激光双光子显微镜扫描深度
双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。双光子显微镜作用
双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。双光子激发的基本原理是：在高光子密度的情况下，荧光分子可以同时吸收2个长波长的光子，在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后，发射出一个波长较短的光子；其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双（多）光子成像优势在于，具有更深的组织穿透深度，利用红外光，能够在层面检测极限达1mm的组织区域；因信号背景比高，而具有更高的对比度；因激发体积小，具有定点激发的特性，具有更少的光毒性；激发波长由紫外、可见光调整为红外激发，能够更加地安全。双光子显微镜作用
