膜片钳放大器的工作模式;(1)电压钳制模式:在钳制细胞膜电位的基础上改变膜电位,记录离子通道电流的变化,如通道电流;EPSC;IPSC等电流信号它是膜片钳的基本工作模式。(2)屯留钳向细胞注入刺激电流,记录膜电位对刺激电流的响应。记录的是动作电位,EPSP;IPSP等电压信号膜片钳技术实现膜电位固定的关键是在玻璃微电极前沿与细胞膜之间形成高阻(10GΩ)密封,使与电极前开口相连的细胞膜与周围环境电隔离,通过施加指令电压来钳制膜电位。小片膜的孤立使对单个离子通道进行研究成为可能。日本单电极膜片钳电生理工具

实验溶液浸溶细胞溶液和微电极玻璃管内的填充液成分对全细胞膜片钳记录也是很重要的内容,这关系到封接的容易程度、细胞存活状态及膜电位的状态等。在实验记录过程中,尤其是神经生物学实验,需要迅速更换细胞浸溶液浓度以免受体敏感性降低(desensitization)或需要模拟快速突触反应的寿命。原则上细胞的浸溶液成分或玻璃管内填充液成分应该与细胞外或细胞内间质的成分相似,实际研究中,为了探讨某些通道或电位特性,对这些实验溶液的成分或浓度会作必要调整,没有哪种溶液是理想的。芬兰脑片膜片钳系统典型的单通道电流呈一种振幅相同而持续时间不等的脉冲样变化。

膜片钳技术与其他技术的结合Neher等**将膜片钳技术与Fura2荧光钙测量技术相结合,同时进行细胞内荧光强度、细胞膜离子通道电流、细胞膜电容等多项指标变化的快速交替测量,从而获得同一事件过程中各因素的各自变化,进而分析这些变化之间的关系。Neher将能够光解钙离子的钙螯合物引入膜片钳技术,进而可以定量研究钙离子浓度与分泌速率的关系以及相对较大的分泌速率。他还发明了膜片钳的膜电容检测与碳纤维电极的电化学检测相结合的技术。然后***将光电联合检测技术和碳纤维电极电化学检测技术相结合。这种结合既能研究分泌机制,又能鉴定分泌物质,弥补了各单一方法的不足。Eberwine于1991年***将膜片钳技术与RT-PCR技术相结合,可以在分子水平上解释形态相似但电活动不同的结果,随后开始了膜片钳与分子生物学技术相结合的时代:基因重组技术和膜通道蛋白重建技术。
离子通道结构研究∶目前,绝大多数离子通道的一级结构得到了阐明但根本的还是要搞清楚各种离子通道的三维结构,在这方面,美国的二位科学家彼得阿格雷和罗德里克麦金农做出了一些开创性的工作,他们到用X光绕射方法得到了K离子通道的三维结构,二位因此获得2003年诺贝系化学奖。有关离子通道结构不是本PPT的重点,可参考杨宝峰的和Hill的 不同的全自动膜片钳技术所采用的原理如PopulationPatchClamp技术∶同SealChip技术一样,完全摒齐了玻璃电极,而是采用PatchPlate平面电极芯片。该芯片含有多个小室,每个小室中含有很多1-2μm的封接孔。在记录时,每个小室中封接成功的细胞|数目较多,获得的记录是这些细胞通道电流的平均值。因此,不同小室其通道电流的一致性非常好,变异系数很小。美国Axon(MDS)公司采用这一技术研发出了全自动高通量的lonWorksQuattro系统,成为药物初期筛选的金标准滔博生物TOP-Bright专注基于多种离子通道靶点的化合物体外筛选,服务于全球药企的膜片钳公司,快速获得实验结果,专业团队,7*39小时随时人工在线咨询.脂质层电导很低,由于双分子层的结构特点,形成了细胞的膜电容,通道蛋白开闭状况主要决定了膜电导的数值。进口多通道膜片钳厂家 用膜片钳技术,轻松捕捉离子通道的每一个细微动作!日本单电极膜片钳电生理工具 膜片钳技术的建立。抛光并填充玻璃管微电极,并将其固定在电极支架中。2.通过与电极支架连接的导管向微电极施加压力,直到电极浸入记录槽溶液中。3.当电极浸入溶液中时,给电极一个测量脉冲(命令电压,如5-10ms,10mV)读取电流,根据欧姆定律计算电阻。4.通过膜片钳放大器的控制键将微电极前端的连接电位调至零。这种电势差是由电极中的填充溶液和浸浴之间的不同离子成分的迁移引起的。5.用显微操作器将微电极前缘靠近直视下待记录的细胞表面,观察电流的变化,直至阻抗达到1gω以上,形成“干封”6。将静息膜电位调整到预期的钳制电压水平,这样当细胞没有钳制到零时,放大器可以从“搜索”变为“电压钳制”。日本单电极膜片钳电生理工具