Tris缓冲体系广泛应用生物制剂研发与生产过程中,例如目前已上市的两款mRNA**疫苗均选用Tris/Tris-HCl作为其制剂缓冲体系,此外该缓冲体系还***用于抗体蛋白纯化等生物制剂生产环节。艾伟拓产品团队在此向您推荐一种操作简便且复现性较好的缓冲液配制方法:使用氨丁三醇(Tris)及盐酸氨丁三醇(Tris-HCl)固体粉末进行配制。使用时,可根据目标浓度及pH,计算并直接称取两种固体粉末混合,溶解定容,至于两种固体粉末的用量如何确认,您可以参考以下实验步骤以及艾伟拓实验室实测值,通过一个简单的预实验进行确认:AVT试剂级TRIS-HCl已登记!河北采购TRIS
Tris-HCl和HEPES的优缺点对比。
首先,Tris-HCL 是什么?Tris缓冲液是在生化研究及制剂生产中使用较**的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围,如Tris-HCl缓冲液:pH=7.5~8.5;Tris-磷酸盐缓冲液:pH=5.0~9.0。
它的主要优点是碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的范围pH缓冲液;对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
它的缺点是pH受浓度影响较大,稀释10倍,pH变化大于0.1。温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4。
HEPES 缓冲液是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力,常用在体外诊断、DNA/RNA提取、脂质体药物等方面。
它的优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值,并对细胞无毒性作用。
可是在高浓度时对一些细胞可能有毒,与其他缓冲剂相比成本略高,这就是它的缺点之一。
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奥加伊妥珠单抗(Besponsa;inotuzumabozogamicin)是辉瑞开发的一款创新ADC,由靶向CD22的单克隆抗体和细胞毒剂卡奇霉素两部分组成。剂型为冻干粉,其制剂***中,蔗糖主要发挥冻干保护剂作用,氨丁三醇(TRIS)为pH缓冲剂。CD22抗原在B细胞表面普遍存在,奥加伊妥珠单抗能够靶向*细胞,并与之表面的CD22抗原结合。随后,这些ADC会被内吞入*细胞,卡奇霉素会进一步发挥它的功效,造成*细胞的死亡。2017年6月28日,BESPONSA获欧盟批准上市。2017年8月17日,美国食品药品监督管理局(FDA)批准将BESPONSA用于***成人复发或难治性前体B细胞急性淋巴细胞白血病。值得一提的是,这是***获得FDA批准的靶向CD22的抗体偶联药物。
Tris 是一种适合在pH 7.0 - 9.2 内工作的缓冲盐,在蛋白质或者核酸的缓冲液中较为常见。作为缓冲液,Tris 有以下几个优点:
1. 在pH 7.5 - 9.0 的范围内,Tris 有较强的缓冲能力;
2. Tris对许多酶的反应不强烈,它在水中溶解度非常高;
3. Tris缓冲液对生物化学过程干扰很低,比如它不会与钙、镁离子及重金属离子产生沉淀物;
4. Trist缓冲剂的应用范围很广,在分子生物学,化妆品,体外诊断,生物化学和涂料等方面有重要的发挥;
5. Tris拥有着较广的应用范围。它碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液。
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Tris是生化实验及制剂生产中常见的缓冲体系,在生物医药等领域得到了广泛应用,如目前已上市的**mRNA疫苗其中一款(mRNA-1273®,Moderna,2020)就选用Tris作为缓冲体系。近日,Moderna公司在第五届科学和技术日(Science and Technology Day)活动报告中指出,使用Tris缓冲液可以减少加合物的生成,从而允许mRNA产品在2-8℃环境下的长期储存。本次AVT产品团队为您分享另一款制剂***中用到Tris的已上市产品,由辉瑞开发的ADC药物奥加伊妥珠单抗(贝博萨®;Besponsa)试剂级TRIS-HCl已登记。广东有登记号TRIS大批量采购
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Tris缓冲体系广泛应用生物制剂研发与生产过程中,例如目前已上市的两款mRNA**疫苗均选用Tris/Tris-HCl作为其制剂缓冲体系,此外该缓冲体系还***用于抗体蛋白纯化等生物制剂生产环节。艾伟拓产品团队在此向您推荐一种操作简便且复现性较好的缓冲液配制方法:使用氨丁三醇(Tris)及盐酸氨丁三醇(Tris-HCl)固体粉末进行配制。使用时,可根据目标浓度及pH,计算并直接称取两种固体粉末混合,溶解定容,至于两种固体粉末的用量如何确认,您可以参考以下实验步骤以及艾伟拓实验室实测值,通过一个简单的预实验进行确认:1.分别配制目标浓度的Tris与Tris-HCl(这里以0.1mol/L为例)2.两种溶液分别取不同体积混合成相同体积(这里以100mL为例)的缓冲液,测定溶液pH.、摸索出两种溶液适宜比例后,根据计划配置的缓冲液体积,倒算两种固体粉末的用量。基于该方法,我们复现了Moderna的**mRNA疫苗中的Tris缓冲溶液,pH理论值为7~8,实测值为7.47(注:该实测值为溶液中*包含Tris/Tris-HCl,不含mRNA-LNP及其他辅料情况下的pH值)。该方法的优势是操作简便,只需称取及溶解两步,在外界温度及溶液浓度相同的情况下,复现性较好,且无需使用浓盐酸等严格受限的试剂。河北采购TRIS
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