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CoIP基本参数
  • 品牌
  • 广州基云生物
  • 型号
  • GCB2086CoIP
  • 是否定制
CoIP企业商机

COIP技术优点如下:

相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;

蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;

可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

然而该技术也存在缺点,具体如下:

可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;

两蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;

须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择后面检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。 免疫共沉淀研究蛋白互作,高特异灵敏,简便兼容,揭示生物奥秘!广西CoIP-WB检测

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Co-IP的优点主要体现在以下几个方面:高特异性:通过使用特异性抗体,Co-IP能够精确地捕获目标蛋白及其相互作用伙伴,减少非特异性干扰。灵敏度高:该方法能够检测到低丰度的蛋白质相互作用,适用于研究微弱或瞬时的蛋白互作。适用于多种样本类型:无论是细胞裂解液、组织提取物还是纯化后的蛋白质复合物,Co-IP都能进行有效分析。与质谱技术兼容:Co-IP与质谱分析相结合,可以鉴定互作蛋白的身份,提供更为详尽的互作网络信息。操作相对简便:Co-IP的实验流程相对清晰,操作简便,适用于大多数实验室的研究需求。广西CoIP-WB检测IP-WB(免疫沉淀-Western Blot)技术应用场景。

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Co-IP(免疫共沉淀)技术被广泛应用于生物学和医学研究领域,特别是在蛋白质相互作用、信号转导、疾病机制等方面。因此,许多从事这些领域的研究人员都在使用Co-IP技术。以下人员可能会使用Co-IP技术。生物医学研究人员:在研究疾病的发生机制、信号转导通路、蛋白质相互作用网络等方面,经常利用Co-IP技术来验证和发现新的分子机制。药物研发人员:在药物研发过程中,通过Co-IP技术来鉴定和验证药物与特定蛋白质相互作用的分子机制,以评估候选药物的有效性和选择性。蛋白质组学研究人员:利用Co-IP技术结合质谱分析,对蛋白质相互作用网络进行高通量鉴定和分析,揭示蛋白质在生命过程中的功能和调控机制。基础医学研究人员:在研究细胞生物学、分子生物学等基础医学领域时,也会使用Co-IP技术来探索蛋白质之间的相互作用和调控关系。

Co-IP(免疫共沉淀)技术的基本原理是基于抗原与抗体之间的特异性结合,从而实现对蛋白质相互作用的研究。在Co-IP实验中,研究人员使用特异性抗体与目标蛋白结合,形成抗原-抗体复合物。这个复合物随后被吸附到固化了蛋白A或G的支持物上,由于这些蛋白具有吸附抗体的能力,因此相应的抗原分子及其相互作用蛋白质也被一同吸附。这个过程称为沉淀。接下来,未被沉淀的蛋白质通过缓冲液的流洗被去除,确保只有与目标蛋白特异性结合的蛋白质被保留下来。这些被沉淀的蛋白质复合物随后被洗脱下来,并通过特定的检测方法进行分析,从而证实蛋白质之间的相互作用。Co-IP技术为深入研究蛋白质相互作用提供了有力工具,有助于揭示蛋白质的功能和调控机制。免疫共沉淀实验涵盖样品处理、抗体处理、共沉淀、洗涤及蛋白鉴定,确保精确检测蛋白相互作用。

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免疫共沉淀CoIP实验,细胞的收集及裂解方法如下:

收集2E7个细胞样品,加入PBS洗涤细胞,离心后弃上清收集细胞沉淀。

准备500μl预冷的CellLysisBuffer,分别加入5μlProteaseInhibitor、5μlPMSF,混匀后加进细胞沉淀中吹打均匀,冰上孵育30min,期间涡旋混匀几次。

4℃,12000rpm离心10min,取上清,进行蛋白浓度测定及后续实验。广州基云生物,在IP互作组检测和关键机制分子筛选验证领域,具有丰富的经验,助力您的互作机制研究,欢迎垂询合作。 Co-IP揭示蛋白互作,验证复合物形成,探究信号通路,助力蛋白研究!广西互作蛋白检测CoIP mass

IP-WB实验常用于验证蛋白质之间的相互作用。广西CoIP-WB检测

CoIP-Mass和CoIP-WB检测要点:

互作蛋白筛选和验证:数据分析以非标定量信号强度(LFQintensity和FC>10)作为强阳筛选,以文献查阅,功能匹配,批量CoIP-WB验证,提高验证成功率。理想CoIP-MS结果的蛋白定量都到超过1000种蛋白。其中绝大部分蛋白为非特异结合或背景蛋白。以目的蛋白的富集信号强度和差异倍数作为参考(相对强信号和差异),分析实验组中明显定量较高且差异较大的蛋白,作为重要候选蛋白。同时对重要候选蛋白进行STRING互作分析,文献分析,目的蛋白功能匹配分析,选择Top的4-5个蛋白进行CoIP-WB验证,提高CoIP-WB成功率。 广西CoIP-WB检测

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