CoIP-Mass和CoIP-WB检测要点：
试验设计：尽量进行试验组别设计和进行生物学重复检测，提高后续验证的阳性率。常规过表达单组（AbIPvsIgGIP）；动态互作组学（实验组vs对照组vsIg组）。根据目的设计适当的生物学重复。如果后续以CoIP-Mass数据进行互作组标准分析，则需要3-4组生物学重复；如果后续以寻找关键互作蛋白，进行机制深入研究，则建议1-2次生物学重复。经验显示单次重复假阳性率90%。
蛋白表达和细胞量：细胞用量要求大(2-10e7细胞量），建议不少于5e7（金标准：320g离心细胞量50μl，保障项目用量）。低表达蛋白，建议使用过表达组进行检测。蛋白表达可根据WB结果或初步根据数据库判定（ProteomicsDB；HumanProteinAtlas）。 免疫共沉淀实验涵盖样品处理、抗体处理、共沉淀、洗涤及蛋白鉴定，确保精确检测蛋白相互作用。湖北蛋白蛋白互作检测CoIP联合质谱检测
结合了抗体的磁珠或树脂（Beads）与样本裂解液孵育，通过”抗原-抗体“之间的免疫作用，诱饵蛋白被吸附在Beads上，与此同时，诱饵蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗涤去掉未结合的蛋白后，再用洗脱缓冲液将互作蛋白复合物从Beads上洗脱下来，得到免疫共沉淀（Co-IP）产物。Co-IP产物既可以用WesternBlot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定未知蛋白。当没有合适的诱饵蛋白抗体时，还可以通过表达融合了Flag标签的诱饵蛋白，利用Flag标签抗体做免疫沉淀。即样本过表达Flag-Bait，经裂解后与anti-Flag珠子孵育，诱饵融合蛋白与Beads结合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再经洗涤、洗脱后，用WB或质谱检测。湖北蛋白蛋白互作检测CoIP联合质谱检测IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）技术应用场景。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种经典的生物学技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。它以其独特的优势在蛋白质组学、生物化学和细胞生物学等领域中得到了大范围应用。Co-IP的主要优点包括。直接性：Co-IP能够直接检测蛋白质之间的相互作用，从而提供关于蛋白质功能和调控机制的直接证据。特异性：通过使用特异性抗体，Co-IP能够精确地捕获目标蛋白及其相互作用伙伴，减少非特异性干扰。灵敏度：Co-IP能够检测到低丰度的蛋白质相互作用，这对于研究微弱或瞬时的蛋白互作具有重要意义。适用性广：该技术适用于多种样本类型，包括细胞裂解液、组织提取物和纯化后的蛋白质复合物。兼容性强：Co-IP技术可以与其他技术相结合，如质谱分析，从而提供更详尽的互作网络信息。综上所述，Co-IP技术的优点在于其直接性、特异性、灵敏度、大范围的适用性和与其他技术的兼容性，这些优点使其成为研究蛋白质相互作用的有力工具。
Co-IP（免疫共沉淀）实验注意事项众多，以确保实验的准确性和可靠性。首先，抗体的选择至关重要，必须选择特异性强的抗体，避免非特异性结合导致背景噪声。其次，样品的处理过程需要严格控制，确保样品纯度和完整性，减少杂质或降解产物对结果的影响。实验过程中，操作细节也需特别注意，如避免抗体过量使用，确保洗涤步骤充分，以去除非特异性结合的杂质。此外，实验条件的选择和优化同样重要，包括pH值、离子浓度、温度等因素，都可能影响实验结果。另外，结果的验证和重复实验也是必不可少的，通过不同抗体或实验条件的重复实验，或使用其他方法进行验证，如质谱技术，以提高结果的可靠性和准确性。总之，Co-IP实验需要注意抗体选择、样品处理、操作细节、实验条件以及结果验证等多个方面，以确保实验的准确性和可靠性。Co-IP揭示蛋白互作，验证复合物形成，探究信号通路，助力蛋白研究！
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）的局限性主要包括：可能检测不到低亲和力和瞬间的相互作用：低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质之间的相互作用可能检测不到，这可能导致某些重要的相互作用被遗漏。不能确保直接相互作用：免疫共沉淀不能保证沉淀的蛋白复合物是由直接相互作用的两种蛋白组成。两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用。灵敏度限制：免疫共沉淀的灵敏度不如某些其他技术，如亲和色谱，这可能影响到对低丰度蛋白或微弱相互作用的研究。样本纯度要求高：如果将蛋白复合物直接进行质谱分析，需要得到较高纯度和浓度的蛋白复合物样品，这并非易事，并且成本较高。对抗体要求高：用于免疫共沉淀的抗体不是总是与操作相合适，与Western blotting或者 ELISA相比容易出现假阳性反应。Co-IP实验要点：样品新鲜、抗体特异、偶联充分、洗涤彻底，确保结果准确可靠！内蒙古免疫共沉淀CoIP WB
Co-IP和ChIP基本原理方面的区别有什么。湖北蛋白蛋白互作检测CoIP联合质谱检测
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种在生物药物领域广泛应用的技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。该技术通过利用特异性抗体将目标蛋白与其相互作用的蛋白一同沉淀下来，从而揭示蛋白质间的相互作用关系。在蛋白泛素化研究方面，Co-IP技术也发挥着重要作用。通过该技术，研究人员可以鉴定并验证与泛素连接酶和泛素受体相互作用的蛋白质，进一步揭示泛素化修饰的调控机制。同时，结合质谱分析，Co-IP技术还可以鉴定泛素化修饰的靶标蛋白质及其相互作用蛋白质，揭示泛素化修饰在细胞信号传导、代谢调控等生命过程中的功能和调控网络。湖北蛋白蛋白互作检测CoIP联合质谱检测
