qPCR法,即定量聚合酶链式反应(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原体检测中的应用主要体现在以下几个方面:
1. 快速定性检测:qPCR法可以快速检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治*用细胞中潜在的支原体污染。
2. 临床样本检测:qPCR法可用于检测实验室样本及临床样本中的支原体,具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。
3. 监管要求:基于TaqMan的qPCR测定专门针对检测细胞治*和复杂生物生产样本中的支原体而开发,其性能满足或超出监管要求,如10CFU/mL。
4. 药物质量控制:qPCR法提供早期检测支原体污染的方法,适用于药物质量控制,具有快速、高度特异性、灵敏性,并符合国际准则。
细胞培养为什么建议使用支原体检测?深圳细胞培养支原体预防试剂多少钱
LAMP法,即环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification),是一种在恒定温度下进行的核酸扩增方法。它由日本学者Notomi于2000年开发。LAMP法检测有以下特性:
快速高效:LAMP技术可以在1小时内把几拷贝的目的序列迅速扩增到10^9^~10^10^拷贝,扩增效率高。
简便性:LAMP技术不需要进行模板的预变性,减少了PCR技术升降温带来的影响以及对昂贵、精密实验仪器的要求,同时扩增效率高,可以在较短时间内完成检测。
LAMP法因其快速、高效、特异、灵敏和经济等优点,已经应用于病原菌、寄生虫、病毒、疾病和转基因产品检测等领域,并且还将广泛应用于临床诊断、环境监测、食源安全等领域,具有更为广阔的发展应用前景。
支原体检测试剂厂家支原体去除的实验步骤?
细胞培养中,支原体检测的重要性体现在以下几个方面:
1. 高污染发生率:支原体对培养细胞的污染发生率非常高,据估计平均发生率在60%左右。
3. 隐匿性强:支原体污染具有很高的隐匿性,早期不容易被发现,除非使用特异性和灵敏度都非常高的专业检测试剂盒。
3. 影响实验结果:支原体污染会改变细胞的生理性质,影响实验结果的准确性。细胞培养物一旦被支原体污染,会改变细胞DNA、RNA及蛋白表达,导致实验数据不准确、不稳定。
4. 难以通过肉眼或常规方法发现:支原体污染无法通过肉眼检查细胞来发现,也不能通过向培养基中加入抗*素控制。
5. 对细胞培养数据可靠性的影响:支原体污染会降低细胞系的有效性,使得细胞培养数据失去可靠性,无法为生命科学研究提供有意义的数据。
6. 预防和控制污染的必要性:定期进行支原体检测是细胞培养实验室进行自我质量监控的必要组成部分,有助于及时发现并控制污染,保证实验的准确性和重复性。
7. 避免细胞株受损:支原体污染可能导致细胞株受损,影响细胞株的质量和研究价值。及时检测和清*支原体污染有助于保护珍贵的细胞资源
检测新鲜培养基是否有支原体污染,可以采用以下五种方案:
1. 培养法:这是一种传统且可靠的方法,通过将培养基接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上,观察是否有支原体生长。这种方法较为耗时,但成本较低。
2. 荧光染色法:使用特定的荧光染料(如Hoechst 33258)对细胞进行染色,然后在荧光显微镜下观察。如果存在支原体污染,可以看到细胞表面或细胞间隙中支原体DNA的荧光染色。
3. PCR法:通过设计针对支原体特定序列的引物,利用PCR技术特异性扩增目标DNA。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测,如果出现条带则表明存在支原体污染。
4. 电镜观察法:使用电子显微镜直接观察培养细胞中的支原体污染情况。这种方法可以提供直观的支原体形态信息,但设备要求较高。
5. 一步法恒温支原体检测:使用特定的试剂盒,如Yeasen一步法恒温支原体检测试剂,采用等温扩增技术,通过颜色变化(由蓝紫色变为天蓝色)进行快速检测。
细胞培养中污染了支原体会怎么样?
如果需要对细胞进行直接取样,可以先将细胞从培养瓶中消化下来,然后用无菌的PBS缓冲液洗涤几次,以去除可能附着在细胞表面的支原体。接着,将细胞悬浮在适量的PBS缓冲液中,取一部分细胞悬液放入无菌离心管中。对于贴壁细胞,也可以直接用无菌的细胞刮将细胞从培养瓶壁上刮下,然后进行取样。在取样过程中,要注意保持操作的轻柔,避免对细胞造成损伤。同时,要尽快将取好的样本送到检测实验室,避免样本长时间放置而导致支原体数量发生变化。此外,为了提高检测的准确性,可以进行多次取样。例如,可以在不同的时间点对同一批细胞进行取样,或者从不同的培养瓶中取样进行检测。总之,正确的细胞支原体检测取样方法对于准确判断细胞是否被支原体污染至关重要。只有严格按照无菌操作要求进行取样,才能为后续的检测工作提供可靠的样本,确保细胞培养的质量和安全。支原体检测的应用场景?苏州细胞支原体去除货期
支原体检测假阳性的原因?深圳细胞培养支原体预防试剂多少钱
在微生物的世界里,支原体是一种微小却有着独特地位的生物体。支原体是一类没有细胞壁的原核微生物,其形态多样,有的呈球形,有的呈丝状。由于没有细胞壁,支原体在形态上具有较大的可变性,能够适应不同的环境条件。支原体虽然微小,但却不可忽视。它们存在于自然环境中,土壤、水、空气以及动植物体内都可能有支原体的身影。在人体中,支原体也可能引起多种疾病。例如,支原体肺炎就是由支原体引起的一种常见呼吸道疾病。患者会出现发热、咳嗽、乏力等症状,给人们的健康带来威胁。深圳细胞培养支原体预防试剂多少钱