即用型PEI转染试剂常见问题

注意事项质粒质量：请务必使用高质量转染级无内质粒（推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒）。通过260nm光吸收测定DNA浓度，260nm/280nm比值确定DNA纯度（比值应该在1.8~2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。如想申请PEI试用装，欢迎关注公众号：Mine-bio，回复“申请PEI”，即可参加！PEI转染试剂是一种高分子化学类转染试剂。即用型PEI转染试剂常见问题

细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法：生物转染，物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体，以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见，其侵染效率可以达到90%以上，但常因安全性等问题，很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因，无论哪一种都需要特定的设备，且一分钱一分货，性能好的价格也都很性感。上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商，更多关于转染试剂相关问题，欢迎咨询上海曼博生物！也欢迎关注我们的公众号：Mine-bio查看更多技术文章！回复关键词“PEI申请”可申请试用装！MirusPEI转染试剂用PEI转染试剂为什么会出现沉淀?

1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞，在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板，可适当降低铺板密度，以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞，可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情况下，DNA-PEI复合物仍能转染细胞，但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。更多关于PEI转染试剂相关产品问题，欢迎咨询上海曼博生物！近期还有PEIfree申请活动，欢迎咨询上海曼博生物！欢迎关注我们的公众号Mine-bio，回复“PEI转染试剂”即可领取！

PEIMAX——高产工业化转染试剂-高度浓缩，可制备大量转染试剂Polysciences转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的产品，因其较高的转染效果，已广泛应用于工业化生产。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔二个碳原子，即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(protonsponge)体。PEI可用作转染试剂，它可以缩聚DNA分子形成颗粒并转染真核细胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成线性聚乙烯亚胺瞬时转染试剂。PEIMAX是一款高度浓缩的粉剂，大量科学家选择PEIMAX，在内部自行制备低成本高效益的PEI转染试剂。多年以来，经过众多业内人士评审的公开研究和出版文献表明，在HEK293、CHO和Sf9系统中可获得很高的转染效率，在重组抗体和病毒载体生产中稳定性高，可靠性强。PEIMAX提供从96孔板到200L生物反应器持续的高基因表达细胞体系，实现从新药研发到工业化生产的轻松过度。而且与大多数细胞转染方案相比，使用PEIMAX至少可降低40%转染成本（部分案例可降低90%转染成本）。如想申请PEI试用装，请关注我们的公众号：Mine-bio，回复关键词“PEI申请”，即可参加！PEI转染试剂会不会有毒性？

瞬时转染方法：1.接种细胞：转染前一晚，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果：在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。还有PEI试用装申请活动，关注公众号：Mine-bio，私信回复：PEI申请，即可参加哪里有卖GMP等级的PEI转染试剂？25KPEI转染试剂优化方案

哪个公司有卖GMP等级的PEI转染试剂？即用型PEI转染试剂常见问题

稳定转染方法：1.接种细胞：转染前一晚，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物：DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞：直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后，添加½体积的包含30%血清的生长培养基。即用型PEI转染试剂常见问题