鼠尾Ⅰ型胶原:材料与方法:1.主要材料、试剂和仪器鼠尾、盐酸、等渗氯化钠溶液、钙液、磷液均购自上海晶纯生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射线衍射仪。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原蛋白取大鼠尾巴洗净,用75%的乙醇浸泡5min。将尾巴剪开,去掉皮毛,并剪成小段,抽出银色的肌腱。将肌键剪断置于平皿中,用无菌等渗氯化钠溶液浸泡。吸去等渗氯化钠溶液,将肌键置于平皿中剪碎,按每克肌键50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。摇晃,将肌键分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g离心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成胶冻状凝胶,置于冰箱4℃保存。鼠尾胶原醋酸溶解:稀释一定数量的胶原溶液。武汉鼠尾胶原服务电话
鼠尾胶原:1实验制备:实验设备及材料:大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原。实验内容:1、制备鼠尾胶原(两个同学一组操作)。2、切割小玻片。3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。实验步骤:制备鼠尾胶原:1、取大鼠尾巴洗净,75%酒精浸泡5分钟;2、手持尾巴,用止血钳夹住鼠尾的较高,折断尾骨后拉出尾腱;3、将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡;4、重复步骤2、3,直至尾腱量够用;5、吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克)。开封正规鼠尾胶原厂家本品可用于细胞培养皿的包被,特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养。
胶原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解,水解条件温和,反应速率快,提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构,蛋白纯度高,理化性质稳定,且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者碱进行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑,然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白,探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响,给出了酶对胶原提取较佳工艺配比,酶与牛腱的质量比为0.1时效果较佳,而使用无花果蛋白酶时,0.01的配比较佳。
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:三维胶原的制备鼠尾胶原蛋白型在浓度1mg/ml以上,pH左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成胶过程中需要加入0.06体积的0.1mol/LNaOH来中和。需要的溶液(均需要无菌、预冷)10mg/L酚红用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),双蒸水200ul鼠尾胶原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结)立即混匀。再加入100ul10PBS10培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法,并且制作简便,成本低廉。
一种基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法:一般的生物体中提取的胶原蛋白多为混合型,之前多从牛皮、猪皮、牛腱中提取,但这类胶原蛋白不光有油脂等其他杂质,也存在着II型及其他一些胶原蛋白亚型;同时,这种畜牧业大量饲养的动物存在着例如疯牛病等一些生物性疾病及病毒传染,如果用此开发医用产品更加存在着品质的不稳定及潜在的风险及危害;再次,人的真皮中主要含有I型和III型,但III型不易大量获得,故应用单一的I型胶原蛋白是解决体外应用的医用产品引起的抗原性问题的关键,这也是I型胶原蛋白抗原性低的原因之一。同时,I型胶原蛋白的三重螺旋的氨基酸结构决定了它的一些特有的性能,如机械性能、促进细胞生长、弱抗原性、可生物降解性和胶原的自缔合性。将黏稠的胶体溶液进行高速冷冻离心处理。南京正规鼠尾胶原厂家推荐
制备鼠尾胶原:摇晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期。武汉鼠尾胶原服务电话
鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法。各个材料及其重量配比为鼠尾胶原蛋白∶聚乙烯醇∶壳聚糖为余量为水,采用冷冻干燥工艺制备。本发明所制备的止血材料主要采用鼠尾胶原蛋白制备,较传统的止血材料不可吸收、容易引起机体过敏、止血效果差等缺点,本发明所制备的止血材料具有人体内可吸收,生物相容性好;止血效果快,具有很强的亲水性;同时可启动血小板的凝聚,一旦血小板凝聚,就可形成血栓,进而促使血浆结块阻止血流。同时,胶原表面的特定区域可以与细胞表面存在的类似纤连蛋白的糖蛋白结合,可以起到防止肠粘连的功效。武汉鼠尾胶原服务电话
鼠尾胶原醋酸溶解:1.将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中,制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2.建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3.稀释一定数量的胶原溶液。4.按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克)。石家庄鼠尾胶原单价鼠尾胶原实验应用:探讨应用鼠尾胶原在豚鼠前庭毛细胞膜片钳实验中的促进毛细胞贴壁效...