荧光标记技术是指运用荧光染料与待研究对象结合,利用它的荧光特性,提供待研究对象相关信息。荧光标记具有操作简便、高稳定性、高灵敏度等优势,使荧光染料在生命科学研究中应用,包括:标记活细胞或固定细胞中的蛋白质、多肽;作为功能性指示剂表征细胞健康状况;设计各种荧光探针,寻找特定蛋白或药物靶点。应用分类:多肽、蛋白、抗体标记:氨基标记、巯基标记、羧基标记;***成像:水溶性/脂溶性荧光染料、近红外I区/II区荧光染料南京星叶生物科技有限公司提供不同用途的荧光染料,了解更多(包括但不限于)
PI常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。天津荧光染料橙色
染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一类亲脂性荧光染料家族,用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料,当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度***增强。它们具有很高的淬灭系数,偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中,这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散,导致在其比较好浓度条件下,将整个细胞染色。它们不同的荧光颜色:DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光),为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI可以分别与标准的FITC和TRITC滤光器一同使用。其中,DiO可以被633 nm He-Ne激光激发,并且具有比DiI更长的激发和发射光波长,为标记细胞和组织的那些本身就具有本底荧光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示踪中非常有用,因为它们所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织,并且在红外光范围内,其本底荧光水平很低。天津荧光染料橙色脂溶性荧光染料cy3、cy5、cy7等。
罗丹明123一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。罗丹明123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集,并发出黄绿色荧光。罗丹明123***用作检测线粒体膜电位,也常用于细胞凋亡检测。由于细胞内ATP的量与罗丹明123的荧光强度之间有相关性,此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。罗丹明123的比较大激发波长为507nm,比较大发射波长为525nm。在荧光显微镜下观察,呈现黄绿色荧光。
一:工作液配制用缓冲液或者预热的培养液直接稀释储存液到需要的工作液浓度(1~20µM),充分混匀。具体的工作液浓度使用者要根据自身实验体系进行调整。【注意】:对于细胞实验,要控制好总体稀释倍数,DMSO在培养液中的浓度不能超过0.1%,以避免DMSO对细胞的影响。
二:荧光显微镜观察1、用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×104~5×105个/mL。2、在载玻片上孵育细胞,用PBS或HBSS洗涤细胞。3、将Rhodamine123工作液加入载玻片并在37℃下孵育30min至1小时。4、去除Rhodamine123溶液并用培养液洗涤细胞(洗涤细胞后如果要固定,加入10%福尔马林缓冲液并孵育15~20min,接着用PBS洗涤)。5、荧光显微镜观察细胞。
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多肽、蛋白、抗体标记:5(6)-FAM5(6)-FAM5-FAM6-FAM5(6)-FAM,SE5-FAM,SE6-FAM,SE5(6)-TAMRA5-TAMRA6-TAMRA5(6)-TAMRA,SE5-TAMRA,SE6-TAMRA,SE5-ROX6-ROX5-ROX,SE6-ROX,SE***成像:脂溶性荧光染料CY3NHSesterCY3amineCY3maleimideCY3azideCY3COOHCY3alkyneCY3hydrazideCY3ThiolCY5amineCY5NHSesterCY5maleimideCY5azideCY5COOHCY5alkyneCY5hydrazideCY5ThiolCY7amineCY7maleimideCY7azideCY7COOHCY7alkyneCY7hydrazideCY7Thiol水溶性荧光染料Sulfo-Cyanine3NHSesterSulfo-Cyanine3amineSulfo-CY3azideSulfo-CY3carboxylicacidSulfo-CY3alkyneSulfo-CY3hydrazideSulfo-CY3ThiolSulfo-Cyanine5NHSesterSulfo-Cyanine5amineSulfo-CY5azideSulfo-CY5carboxylicacidSulfo-CY5alkyneSulfo-CY5hydrazideSulfo-CY5ThiolCY7NHSesterSulfo-Cyanine7NHSesterSulfo-Cyanine7amineSulfo-CY7azideSulfo-CY7carboxylicacidSulfo-CY7alkyneSulfo-CY7hydrazideSulfo-CY7Thiol近红外I区/II区荧光染料ICG-NHSesterICG-amineICG-maleimideICG-azideICG-COOHICG-alkyneICG-hydrazideICG-ThiolICG-TzICG-DBCO 异硫氰酸荧光素含有一个异硫氰酸酯反应基团这有助于其对通常存在于生物分子中的动漫和巯基基团具有反应性。
荧光染料在细胞实验中具有广泛的应用1、细胞膜标记:可以使用荧光染料标记细胞膜,以观察和研究细胞膜的动态和结构变化。2、染色体和DNA标记:用荧光染料标记染色体或DNA,可以观察和分析DNA复制、转录、修复等过程3、蛋白质标记:通过荧光染料标记蛋白质,可以研究蛋白质的相互作用、定位和运动等特性。4、细胞器标记:使用特定波长的荧光染料可以标记和可视化细胞中的线粒体、溶酶体等细胞器。5、神经科学应用:荧光染料在神经科学中也有广泛应用,如标记神经元和突触,观察神经信号的传递等。6、基因表达分析:通过荧光染料标记基因表达产物,可以定量分析基因的表达水平和细胞中的分布情况。南京星叶生物荧光染料标记蛋白。江苏济南荧光染料
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荧光染料,由于灵敏度高,操作方便,逐渐取代了放射性同位素作为检测标记,其广泛应用于荧光免疫,荧光探针,细胞染色等。包括特异性的DNA染色,用于染色体分析、细胞周期、细胞凋亡等相关研究。另有很多核酸染料在多色染色系统中是非常有用的复染剂,可作为背景对照,标记细胞核使细胞内结构的空间关系一目了然。荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、**基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记**常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)、藻红蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度,就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量,并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。天津荧光染料橙色