SuperFluor活化酯(与Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同)SuperFlour系列荧光探针,具有更强的荧光强度,更广的pH应用范围(pH4~10),更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等荧光染料。1.标记效率低——计算结果显示每摩尔145,000MW的蛋白标记的荧光团少于4mol有以下原因:1)缓冲液中含有痕量伯铵成分,与染料反应降低了标记效率。如果蛋白已经溶于含氨基的缓冲液(如Tris或氨基乙酸),标记前用PBS透析。2)蛋白含量较低(≤1mg/mL)会影响标记效率。3)标记步骤中加入碳酸氢钠的作用是将反应混合物的pH升高至~8,因为在弱碱性环境中标记反应的效率比较高。如果蛋白溶液的缓冲范围在低pH,加入重碳酸盐也无法将pH调节至**适水平。要么加大重碳酸盐的量,要么将缓冲液换成PBS,或用0.1M碳酸氢钠透析等。4)研究显示pH升至9.0~9.4,标记效率和标记速度(只需10min)明显改善。5)不同抗体与荧光团的反应速率不同,染料标记后保留的生物活性程度也不同,因此标准步骤也不是总有比较好的标记结果。为增加标记率,可以对同一样品进行再标记,或减少蛋白的量加大染料的量重新标记。有研究者在室温孵育1小时后再4℃孵育过夜,情况有所改善。Cy5.5含有一个游离胺基,可与多种官能团共轭,包括NHS酯和环氧化合物。河北荧光染料Fluor 680
荧光标记技术是指运用荧光染料与待研究对象结合,利用它的荧光特性,提供待研究对象相关信息。荧光标记具有操作简便、高稳定性、高灵敏度等优势,使荧光染料在生命科学研究中应用,包括:标记活细胞或固定细胞中的蛋白质、多肽;作为功能性指示剂表征细胞健康状况;设计各种荧光探针,寻找特定蛋白或药物靶点。应用分类:多肽、蛋白、抗体标记:氨基标记、巯基标记、羧基标记;***成像:水溶性/脂溶性荧光染料、近红外I区/II区荧光染料南京星叶生物科技有限公司提供不同用途的荧光染料,了解更多(包括但不限于)
河北荧光染料Fluor 680荧光染料可以单独使用,也可以组合成复合荧光染料使用。
InvitrogenCy3染料是一种明亮的橙色荧光染料,可使用532nm激光线激发,并使用TRITC(四甲基罗丹明)滤光片组进行可视化。除了免疫细胞化学应用,Cy3染料通常用于标记核酸。发光说明:Cy3荧光团也是亲脂性神经元和长期DiI细胞追踪试剂的基础,该试剂添加烷基尾(≥12个碳)添加到**荧光团上。Cy3染料是用于成像、流式细胞术和基因组应用的蛋白质和核酸结合物的传统橙色荧光标签。它也是经典亲脂性示踪剂DiI及其变体的基础。根据化学结构,Cy3可分为普通Cy3(常简称Cy3)和磺化Cy3(Sulfo-Cy3)。Cy3水溶性较低,在水相标记反应时常常需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。磺化Cy3是在Cy3的结构基础上磺化的产物,附带2个或3个磺酸根离子。由于磺化效应,磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮,荧光稳定性也提高,可赖受更长时间的曝光。磺化Cy3水溶性极高,所以在标记反应中不需要使用有机共溶剂,特别适合标记蛋白等对有机溶剂敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性极好,并且染料分子本身带电荷,标记到蛋白表面后不会引发疏水性蛋白聚集,提高荧光标记产物的稳定性。当然,磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇,DMSO,DMF等有机溶剂,标记反应也可以在纯有机溶剂中进行。
与花青和罗丹明染料一样,荧光素也是一种有机染料。荧光素的比较大吸收波长为494nm,比较大发射波长为521nm(通常吸收蓝色范围内的光并发射绿色范围内的光),荧光素是一种高荧光物质。即使在非常少量的情况下也可以检测到它,并且在与抗体结合时用于显微镜检查。荧光素的衍生物包括异硫氰酸荧光素、俄勒冈绿和羧基萘并荧光素等。与许多其他荧光染料一样,荧光素价格低廉且易于使用,使其成为生物学研究中很受欢迎的染料之一。与大多数其他染料不同,荧光素在水溶液中是无毒的。因此,它是极少数用作地下水示踪剂的染料之一。D-荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物,存在于多种发光生物体中。
蛋白荧光标记技术是目前**为常见的蛋白体外标记技术,利用级联放大反应原理,将极度敏感性且易于检测的荧光素通过某个基团吸附或共价结合后,标记到特异性抗原或抗体分子上,应用荧光显微镜观察荧光标记物因增强放大效应而产生颜色、光谱等变化,以分析示踪相应抗体或抗原性质与含量的方法。该技术在具有高度精确性的荧光显微镜下,借助高度灵敏性的荧光检测,在各种生物过程中对目的蛋白进行可视化,从而通过抗原抗体高度特异性免疫定量表达或在细胞研究中定位。蛋白荧光标记已成为研究蛋白质互作、酶活性、***示踪以及细胞分选重要工具。蛋白标记常用荧光染料随着蛋白荧光标记技术不断发展,各类荧光素广泛应用于生物实验中,目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。南京星叶生物科技有限公司提供多种性价比高的各类活化荧光素,其荧光染料覆盖波长范围从350nm到790nm,例如Cy系列、SuperFluor系列(效果同AlexaFluor系列)等,用于标记抗体、多肽以及蛋白功能基团,继而生成分子探针,通过荧光成像进行相应检测。Super Fluor 680(效果同Alexa Fluor 680)琥珀酰亚胺酯荧光染料。河北荧光染料Fluor 680
南京星叶生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列)。河北荧光染料Fluor 680
一:染色液制备1、配制储液:储液用无水DMSO或无水EtOH配制,浓度1~5mM。注:未使用的储液建议分装后储存在-20℃,避免反复冻融。2、工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储液,配制浓度为1~5μM的工作液。注:工作液**终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始比较好浓度的摸索。二:悬浮细胞染色1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。2、37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。3、孵育结束,1000~1500rpm离心5min。倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。4、重复步骤3两次以上。河北荧光染料Fluor 680