一：染色液制备1、配制储液：储液用无水DMSO或无水EtOH配制，浓度1~5mM。注：未使用的储液建议分装后储存在-20℃，避免反复冻融。2、工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储液，配制浓度为1~5μM的工作液。注：工作液**终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始比较好浓度的摸索。二：悬浮细胞染色1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。2、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。3、孵育结束，1000~1500rpm离心5min。倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。4、重复步骤3两次以上。目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。北京荧光染料DIO
第二种***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化学公司HoechstAG生产。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是邻苯二甲酰亚胺，具有向A-T富集区插入的趋势，因此后者不常使用。与DAPI相似，此类染料受到紫外线激发并在455nm下发射比较大值，在无结合状态下变为510–540nm。Hoechst染料还具有细胞渗透作用，因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色剂碘化丙啶无法透过细胞膜。在细胞培养中，因为该染色剂无法进入完好的细胞内，所以常常被用来区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种结合剂，但对不同的碱基没有特异性。在核酸结合态下，其比较大激发波长为538nm，比较高发射波长为617nm。未结合状态下碘化丙啶的比较大激发和发射被移到较短的波长和较弱的强度。它也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合。要区分DNA和RNA，必须使用足够的聚合酶。福建荧光染料ICGDiD、DiR、DiO和DiI染料是最常见的细胞膜染料，它们是一族亲脂性的荧光染料，用于细胞的形态学和结构研究。
绿色荧光染料ICG的主要作用吲哚菁绿（IndocyanineGreen，简称ICG）是一种广泛应用于医学和生物领域的荧光染料。它具有独特的化学结构和性质，因此被***用于荧光显像、光热***、生物识别和药物输送等领域。吲哚菁绿的绿色溶解度是其在水中的溶解度，它是衡量该染料在溶液中的溶解能力的重要指标。吲哚菁绿具有较好的水溶性，可以在水中迅速溶解，形成稳定的溶液。这一特性使得吲哚菁绿在医学诊断和***中得到广泛应用。吲哚菁绿的主要作用之一是在医学影像学中作为造影剂。由于其具有强烈的荧光特性，能够在近红外光谱范围内吸收和发射光线，因此被***用于近红外荧光显像技术中。在临床中，医生可以通过注射吲哚菁绿溶液，利用近红外光源对患者进行显像，以观察和评估病变部位的血液灌注情况、淋巴引流途径等。这为医生提供了非侵入性、实时性的影像信息，有助于准确诊断和指导***。此外，吲哚菁绿还在光热***中发挥着重要作用。光热***是一种利用光热效应杀灭肿瘤细胞的方法。吲哚菁绿可以吸收近红外光并将其转化为热能，从而使附近的肿瘤细胞受热破坏。这项技术在*****中具有巨大潜力，因为它可以实现高度精细的***，同时比较大限度地减少对周围正常组织的损伤。
三：贴壁细胞染色1、将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。2、从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。3、在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。4、37℃孵育细胞2~20min，不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。5、吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2~3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5~10min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。四：结果检测样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。南京星叶生物荧光染料标记蛋白。
如何选择的染料？
考虑到荧光染料种类繁多，您如何为您的特定应用选择使用哪种染料？以下是您需要考虑的一些因素。※与实验设计的兼容性：虽然它们可能与其他荧光团共享一些光谱相似性，但每种染料都是***的，并且具有不同的功能、激发和发射波长、波段形状和宽度以及光稳定性。为确保成功，请选择与您的实验设计相辅相成的一种。与设备的兼容性：选择与您正在使用的照明源相匹配的染料。在选择合适的荧光仪器时，请考虑仪器的灵敏度、动态范围、稳定性和通量、信噪比和信空白比。为了获得更好的结果，请确保染料的发射曲线与可用的检测方法相匹配。与样品中其他荧光材料的相容性：在双重或三重标记实验中，您选择的染料的发射和激发曲线不应与其他荧光团重叠。由于许多天然存在的细胞成分会以与您选择的染料或探针相同的波长发出荧光，因此您还需要确保可以从背景自发荧光中清楚地识别所选染料产生的信号。 荧光染料，由于灵敏度高，操作方便，逐渐取代了放射性同位素作为检测标记，其应用于荧光探针，细胞染色等。贵州苏州荧光染料
Cy7 DiC18（DiR）是一个亲脂性、近红外荧光花青染料，这个染料常用于标记细胞质膜。北京荧光染料DIO
除了以上应用，吲哚菁绿还可以用于生物识别和药物输送。在生物识别中，吲哚菁绿可以与特定的生物分子结合，从而实现对这些分子的检测和定量分析。这项技术在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用前景。此外，吲哚菁绿还可以作为药物输送系统的一部分，将药物包裹在其分子结构中，通过近红外光***释放药物，实现靶向***。吲哚菁绿作为一种多功能的荧光染料，在医学和生物领域具有广泛的应用前景。其绿色溶解度的优良性能，使其能够在水溶液中快速溶解，为其在医学影像学、光热***、生物识别和药物输送等方面的应用奠定了基础。随着科学技术的不断进步，相信吲哚菁绿在未来将发挥更大的潜力，为人类健康事业做出更大的贡献。吲哚菁绿作为一种荧光染料，在医学影像学中的应用是**为突出的。它可以通过静脉注射进入人体血液循环系统，并在近红外激光的照射下发出荧光信号。这种荧光信号可以被**的显像设备捕获和记录，从而形成高分辨率、高对比度的影像。这样的影像可以帮助医生观察和分析血管、淋巴系统以及**等病变的情况，提供重要的诊断依据。北京荧光染料DIO
