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支原体基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 型号
  • CM0001
支原体企业商机

支原体检测的样本既可以是细胞,也可以是培养基。在细胞培养中,支原体污染是常见的问题,因此需要对细胞和培养基进行检测。细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床用细胞等都需要进行支原体检查,这通常包括培养法和指示细胞培养法(DNA染色法)。同时,病毒类疫苗的病毒收获液、原液也采用培养法检查支原体,必要时,也可以采用指示细胞培养法筛选培养基。
此外,支原体检测的培养基推荐使用支原体肉汤培养基和精氨酸支原体肉汤培养基等,这些培养基可用于检测药品和生物制品中的支原体。在进行支原体检测时,需要取培养物样品接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上。
因此,支原体检测的样本既可以是细胞,也可以是培养基,具体取决于检测的目的和方法。
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支原体检测实验设计和实验方法需要考虑以下几个关键点:
1. 选择合适的检测方法:根据实验室条件和需求,选择适合的支原体检测方法,如培养法、PCR法、ELISA法、DNA荧光染色法等。
2. 样本的采集与处理:确保样本的采集和处理过程符合无菌操作规范,避免交叉污染。
3. 实验操作的标准化:制定详细的实验操作流程,包括样本接种、培养条件、观察时间点等,以保证实验的可重复性和准确性。
4. 使用适当的培养基:根据支原体的特性选择合适的培养基,如支原体肉汤培养基、精氨酸支原体肉汤培养基等,并确保培养基的灵敏度和特异性。
5. 设置对照组:实验中应包括阳性对照和阴性对照,以验证实验方法的有效性和排除假阳性或假阴性结果。
6. 结果的判定:根据实验方法的不同,设定明确的标准来判定结果,如培养法中观察“荷包蛋”状菌落,PCR法中通过扩增条带的有无来判断。
7. 避免抑制物质的影响:在实验设计中考虑可能存在的抑制物质,并采取适当措施中和或抵消它们的作用。
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qPCR法,即定量聚合酶链式反应(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一种高度灵敏和特异的分子生物学技术,用于检测和定量DNA序列。在支原体检测中,qPCR法的原理主要包括以下几个步骤:
1. DNA提取:首先从待测样本中提取DNA,这可能包括细胞培养上清液或组织样本中的支原体DNA。
2. 设计特异性引物:针对支原体的保守DNA序列,如16S rRNA基因,设计特异性的DNA引物。
3. 荧光标记探针:使用荧光标记的探针,该探针与目标DNA序列互补,能够在PCR扩增过程中与扩增的DNA结合。
4. Ct值确定:Ct值(阈值循环数)是指在PCR反应中,荧光信号强度超过预定阈值的循环次数。Ct值越低,表示样本中支原体DNA的量越多。
5. 定量分析:通过标准曲线法或相对定量法,将Ct值转换为支原体DNA的定量结果。
qPCR法的优势在于其高灵敏度和特异性,能够检测到非常低水平的支原体污染,并且可以在短时间内提供结果,这对于需要快速检测的生物制品生产和细胞培养质量控制非常重要

需要定期检测支原体污染的客户主要包括以下几类:
1. 生物医药企业:生产涉及细胞培养的生物制品的公司,包括疫苗、生物药物、基因产品等。
2. 细胞公司:进行细胞产品的研发和生产的企业,需要确保所用细胞的安全性和有效性。
3. 科研机构:从事细胞生物学、分子生物学、遗传学等研究的学术机构,需要保证实验结果的准确性。
4. 临床单位:使用细胞技术进行的医院或诊所,需要确保用细胞的质量。
5. 细胞库:保存和供应细胞株的细胞库,需要对细胞资源进行定期检测以保证其无污染。
6. 生物技术公司:提供生物技术服务的公司,如细胞培养、基因编辑等,需要确保服务过程中细胞的质量。
细胞培养中支原体预防措施。

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方法

灵敏度

优势

劣势

培养法

☆☆☆

ü 便捷

ü 便宜

ü 金标准

ü 费劳力

ü 耗时长

ü 需要特定的培养基

ü 特定支原体种类需要特定的培养基

DNA染色

(DAPI or Hoescht)

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 可能难以判读结果

ü 无法鉴别支原体种属

ü 可能假阳性可能性

间接染色

☆☆☆

ü 迅速

ü 便宜

ü 易检测

ü 费时

ü 需要细胞系指示

ELISA

☆☆

ü 迅速

ü 客观,易判读结果

ü 可以鉴别支原体种属

ü 受抗体限制

ü 价格高

免疫染色

☆☆

ü 迅速

ü 可检测支原体种属

ü 价格略高

ü 可检测的支原体种属有限

放射自显影

☆☆

ü 迅速

ü 难以判读结果

ü 无法鉴别支原体种属

ü 费劳力

生物发光

☆☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 难以判读结果

ü 无法鉴别支原体种属

PCR

☆☆☆

ü 便宜

ü 迅速

ü 具有特异性

ü 可能假阳性可能性

ü 检测特异性依赖引物特异性

ü 需要提取DNA

Real-Time PCR

☆☆☆

ü 便捷

ü 迅速

ü 具有特异性

ü 结果可靠

ü 高通量

ü 可能假阳性可能性

ü 检测特异性依赖引物特异性

ü 需要提取DNA

LAMP

☆☆

ü 便捷

ü 无需DNA提取

ü *需10min左右的实验操作时间

ü 具有特异性

ü 高通量

ü 可能假阳性可能性

ü 检测特异性依赖引物特异性 支原体检测假阴性的原因?南京细胞支原体去除价格

细胞培养支原体污染怎么去除?杭州支原体检测服务

细胞培养过程中如果发现支原体污染,可以采取以下一些方法尝试去除污染:

1. 抗*素治*:使用针对支原体有效的抗*素,如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果,可以加入高浓度抗*素进行冲击治*,例如庆大霉素 200ug/ml,四环素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并维持24-48小时后再换入常规培养液。
2. 加温处理:支原体不耐热,可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意,高温也可能对细胞造成伤害,因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。
3. 使用支原体清除剂:市场上有专门的支原体清除剂,按照产品说明使用。
4. 使用支原体清*培养基:如Procell支原体清*培养基,这类产品含有清*支原体的特殊成分,可以抑制支原体生长并挽救珍贵细胞。
5. 物理方法:一些实验室采用过滤的方法,使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤培养基和试剂,以阻止支原体的侵入。
6. 细胞传代:在一些情况下,通过细胞传代可能有助于减少支原体的污染程度。
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在微生物的庞大世界里,支原体是一种独特而又常常被低估的存在。支原体极其微小,它们没有细胞壁,形态多样,呈球形、丝状或分枝状等。由于体积小,在普通光学显微镜下很难被清晰地观察到,往往需要借助高倍电子显微镜才能一睹其真容。虽然支原体微小,但它们的生存能力却不容小觑。它们可以在多种环境中生存,包括土壤、水体、动植物体内等。在人体中,支原体也可能引发一系列疾病。例如,支原体肺炎是一种较为常见的由支原体引起的呼吸道疾病。关节液也可作为支原体检测样本,通过穿刺抽取,操作需严格遵循无菌原则。深圳细胞培养支原体预防试剂货期在吸取过程中,要注意避免移液器接触到培养容器的边缘或其他可能被污染的部位。一般来说,吸取...

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