Genovis的FabDELLO在铰链上方的单个位点消化人IgG1,并在两小时内生成均质的Fab和Fc片段(Genovis的IdeS在铰链区下方的单个位点进行消化)。生成的片段可用于结晶和高阶结构(HOS)的NMR研究、结合研究等。突变的铰链区域是zhiliao性候选抗体的常见修饰,以降低效应器功能。这些突变可能会影响具有高底物特异性的酶的抗体消化效率。例如,高度特异性的FabRICATOR(IdeS)消化效率对含有常见LALA突变的抗体产生负面影响。FabDELLO作用于人IgG1铰链上方的单个暴露赖氨酸残基,能够对具有突变铰链区域的抗体进行流行的中级LC-MS分析。例如,用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab,在下铰链区域具有LALA突变,并通过反相LC-MS进行分析。消化产生均匀的Fab和Fc片段。用20mMDTT还原片段,用于中级LC-MS分析,发现产生了均相的Fc/2、轻链(LC)和Fd片段。用FabDELLO消化后观察到的定义峰显示出均匀的片段生成和酶的稳健性能。与 FabRICATOR 相比,FabRICATOR Z 在消化这些 IgG 方面具有更高的效率。四川FabRICATORIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

Genovis集团由瑞典GenovisAB和美国全资子公司GenovisInc.组成。该公司在纳斯达克上市。如需了解更多信息,请访问投资者关系。Genovis的经营理念是为生物制药和研究行业的客户提供工具,以促进和节省开发新治疗方法和诊断的时间。Genovis酶产品,称为SmartEnzymes,被世界各地的科学家使用,创新的产品形式促进了生物药物的开发和质量控制。通过在2020年收购QEDBioscience,产品组合已扩大到包括用于研究、生物药物开发和诊断检测的抗体和试剂。在官网上阅读有关QED的更多信息Genovis研发活动的基石是客户关系,使产品开发能够满足客户需求。与专注于表征新酶、开发新工作流程和新靶点抗体的学术团体的合作同样有价值。山西FabALACTICAIdeS蛋白酶Genovis的IdeS蛋白酶是IgG特异性半胱氨酸蛋白酶。

LC-MS中级分析是一种被大众接受的分析方法,用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制药。它有助于理解多种关键质量属性 (CQA),例如糖基化、氧化和 C 端赖氨酸剪切。这种关于翻译后修饰(PTM)的详细知识是生物制药开发和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色谱柱,可快速进行单克隆抗体的柱上酶切,并产生一致的亚基。该色谱柱含有固定化的FabRICATOR(IdeS)酶,可在铰链下方快速且特异性地消化IgG,产生F(ab')2和Fc片段,而不会出现任何过度消化的风险。为了减少样品处理并为样品制备提供自动化解决方案,FabRICATOR被共价固定在树脂上,并装在适用于HPLC的PEEK色谱柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色谱柱,只需稍作修改,即可使用标准HPLC-MS装置自动生成抗体亚基。然后,FabRICATOR HPLC色谱柱上消解产生的亚基被捕获在在线连接的反相(RP)色谱柱的柱头上。
对于涉及完整Fab或Fc抗体片段的应用,需要在抗体铰链处进行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等传统酶可用于生成 Fab 片段,但非特异性酶活性需要仔细优化,以极大限度地降低多个消化位点的风险。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一个消化位点,可从人 IgG1 生成均质的 Fab 和 Fc 抗体片段。生成的片段可用于结晶和高阶结构 (HOS) 的 NMR 研究、结合研究等。在这里,我们提出了获得完整Fab和Fc抗体片段的不同策略。所得片段显示 GingisKHAN 的有效消化,用于生成完整的 Fab 片段或从依那西普上的融合 TNFR 结构域中分离 Fc。由于 GingisKHAN 的特异性消化依赖于 IgG 的天然折叠,因此在变性条件下特异性受到负面影响。为了使用SDS-PAGE分析消解效率,在加入SDS上样缓冲液之前,停止在分析样品中加入碘乙酰胺的反应。Genovis同时提供IdeS酶的纯化试剂盒。Genovis的IgASAP 是 IgA 消化酶家族。IgASAP Sub1 是一种 IgA1 特异性酶。

与IdeS不同,Genovis的GlySERIAS是一种独特的酶,可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白连接子,例如Gly4Ser和GlyxSery(GS)以及聚甘氨酸(G)接头。该酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域,以促进表征并增加对这些分子的理解。融合蛋白的中级分析既可以降低整体样品的复杂性,又可以对翻译后修饰进行结构域特异性鉴定和监测。为了改善连接子的去除,Genovis建议使用GlySERIASImmobilized。对于连接子表征,我们推荐GlySERIAS冻干。具有柔性接头的独特酶消化融合蛋白;中级方法可降低融合蛋白表征的复杂性;复杂融合蛋白的可靠且可重复的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和丝氨酸残基的重复序列组成的柔性连接子。该酶在天然反应条件下具有活性,能够对复杂的融合蛋白进行中级表征。连接子区域同时在多个位点被消化,导致先前连接的组分分离。活性发生在pH7.6下,孵育时间可以根据所需的产物而变化。GlySERIAS是从噬菌体K克隆而来的,在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为18kDa。反相LC-MS对样品的分析表明,使用Genovis的GlySERIAS进行度拉糖肽的连接子消化后,肽从Fc区域完全去除。四川FabRICATORIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
为Fc聚糖分析提供了一种快速、直接的、自动化,高通量的替代方法。四川FabRICATORIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
如果您想分析单克隆抗体或单克隆抗体分子,现在有了Genovis的一些新产品(IgA酶,IgM酶),其他的模式和分子形式(IdeS高通量的产品形式)来测定和监测许多不同的CQA,Genovis可以缓解使用不同分析方法时可能出现的瓶颈。 生产大量的样品当然很好,但如果分析团队不能足够快地处理它们,那就没有什么意义了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法,当然这些方法要快速,而且可能易于自动化。 这正是我们所能提供的,这使Genovis能够支持更多不同功能的客户。四川FabRICATORIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
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