在1990年代***使用的绿色荧光蛋白(从水母维多利亚水母克隆)及其衍生物(例如藻红蓝蛋白、藻胆蛋白和藻红蛋白等)是当今生物学研究中**常用的一些生物荧光团。虽然荧光团可用于在细胞、细菌和各种***中表达质粒,但它们的使用有一些缺点,即它可能很耗时,并且在融合时还能够改变某些细胞蛋白的正常生物学功能。此外,与许多其他荧光团相比,生物荧光团的光稳定性和灵敏度较低。绿色荧光蛋白(GFP)绿色荧光蛋白是当下流行的生物荧光团之一,由238个氨基酸组成,其中三个负责发出可见绿色荧光的结构。在水母本身中,荧光团与水母发光蛋白(一种蛋白质)相互作用,当添加钙时会发出蓝光。通过DNA重组,研究人员可以使用负责产生蛋白质的基因来研究给定的基因和蛋白质。在这里,在将复合物插入细胞之前,该基因与另一个基因(负责产生所需蛋白质的第二个基因)结合。如果细胞产生绿色荧光,研究人员就可以明显看出该细胞能够表达目标基因。GFP由488nm激光线激发,可在510nm处检测。来自荧光团的微弱信号可以使用抗GFP抗体放大。作为生物标记物,绿色荧光蛋白用于以下功能:监测各种生理过程*识别蛋白质定位*检测转基因表达Super Fluor活化酯(与Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同)。江西荧光染料合成
PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。2.染色过程(1)将1/10培养基体积的PI染色液加入到细胞培养基中(也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基)。(2)在37℃培养细胞10~20分钟。(3)用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。(4)用535nm激发波长,615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事项:PI对人体有刺激性,请注意适当防护。黑龙江石家庄荧光染料Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料。
荧光染料在细胞实验中具有广泛的应用1、细胞膜标记:可以使用荧光染料标记细胞膜,以观察和研究细胞膜的动态和结构变化。2、染色体和DNA标记:用荧光染料标记染色体或DNA,可以观察和分析DNA复制、转录、修复等过程3、蛋白质标记:通过荧光染料标记蛋白质,可以研究蛋白质的相互作用、定位和运动等特性。4、细胞器标记:使用特定波长的荧光染料可以标记和可视化细胞中的线粒体、溶酶体等细胞器。5、神经科学应用:荧光染料在神经科学中也有广泛应用,如标记神经元和突触,观察神经信号的传递等。6、基因表达分析:通过荧光染料标记基因表达产物,可以定量分析基因的表达水平和细胞中的分布情况。
CY7是一种CY染料。CY为花菁(Cyanine)的缩写,是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高的特点CY系染料常被用于蛋白、抗体以及小分子化合物的标记,对于蛋白抗体的标记,可以通过简单的混合反应来完成结合,下面我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法,具有一定的参考意义。一、比较好蛋白制备1)为获得标记效果,请制备蛋白(抗体)浓度为2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值为8.5±0.5。如果pH值低于8.0,应使用1M3)如果蛋白浓度低于2mg/mL,标记效率会**降低。为获得比较好标记效率,建议**终蛋白浓度范围为2-10mg/mL。4)蛋白必须在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的缓冲液中,和铵离子,否则会影响标记效率。2.染色制备(以CY3-NHS酯为例)将无水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中,制备成10mM储备液。通过移液器或涡旋混合均匀计算。使用前需先使用缩合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一个可进行后续标记实验。异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料,目前,这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。
琥珀酰亚胺酯(Succinimidylesters)/NHS酯活性荧光染料用于标记抗体,蛋白质,肽,胺修饰的寡核苷酸和其他生物分子上的游离氨基(-NH2)2、马来酰亚胺(Maleimides)活性荧光染料用于标记抗体,蛋白质和肽上的巯基3、叠氮化物(Azides)活性荧光染料通过点击化学法(Click)标记乙烯基4、炔烃(Alkynes)活性荧光染料通过点击化学方法标记叠氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性荧光染料经碳二亚胺预活化后用于标记胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性荧光染料具有游离氨基的荧光染料,用于与各种亲电子化合物(如活化的酯和环氧化物)偶联。D-荧光素钾盐荧光染料。黑龙江石家庄荧光染料
D-荧光素钾盐是荧光素酶的水溶性底物,存在于多种发光生物体中。江西荧光染料合成
D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值,当底物荧光素过量时,光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是用于研究和药物筛选的流行报告基因。化学发光技术几乎没有背景,使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。标准闪烁计数器可以可靠地测量低至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达报告者的作用外,荧光素酶还常用于极其灵敏的 ATP 检测中[1]。我们提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004)、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。江西荧光染料合成