HE染色细胞质过染分析及应对原因:(1)伊红染色液浓度太高,特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在;(2)切片在伊红染色时间过长;(3)切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时过的太快,而使乙醇分化伊红的作用不能产生。对策:适当稀释伊红染色液,减少伊红染色时间,或者使切片在乙醇脱水等步骤时,停留时间相对均匀。同样,也要检查切片的厚度是否合适。切片中出现蓝黑色沉淀物分析及应对原因:苏木精染色液中的金属膜,黏附在玻片上。对策:每天染色前仔细过滤苏木精染色液,或建议使用半氧化苏木精染色液,如Gill苏木精染色液,可以避免过多的金属膜产生。HE染色是常见的病理染色,是比较基础是病理染色之一。西藏专业的HE染色报告
HE染色细胞浆染色原理:细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系,当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时,胞浆对外不显电性,此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时,大于蛋白质的等电点pH值,表现酸性电离,而带负电荷的阴离子,可被带正电荷的染料染色,现时胞核也被染色,核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被***成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。湖南值得信赖的HE染色服务常规HE染色和特殊染色服务。
HE染色构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,pH值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。
HE染色观察肝脏HE染色切片,首先要在显微镜下找到肝脏的标志性结构——肝小叶。显微镜首先调4倍物镜,调准焦螺旋至视野清晰,可以看到肝小叶结构。人的肝小叶之间结缔组织少,小叶分隔不明显,但动物如猪或小鼠,其肝小叶分界非常明显。肝小叶**有**静脉,在横切片上显示为空洞。肝小叶之间为将物镜调制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小叶结构。肝细胞以**静脉为中心向周围放射状排列,称为肝板。一般在20倍物镜下可以清晰看到肝细胞。20倍物镜下,肝细胞内染色为蓝色的是细胞核,细胞核大而圆,居中,异染色质少而着色浅,能清晰看到核仁。肝细胞胞质丰富,多成嗜酸性,当蛋白质合成旺盛时,胞质内出现散在的嗜碱性物质。肝细胞内有丰富的细胞器比如溶酶体、高尔基体、内质网,等等,但是在光镜下是无法看到的,需要在电镜下才能观察到。当然,肝小叶内除了肝细胞,还有胆小管、肝血窦、肝巨噬细胞等组织形态,但是在HE染色时并不容易观察到。做肝脏HE染色切片主要目的一般都是为了观察肝细胞形态是否完整、胞核有无增大、肝小叶形态是否完整,以检测药物等刺激因素对肝脏的损伤作用。HE染色小攻略技巧分析。
HE染色脱蜡不净的原因及验证方法:1)二甲苯使用过久,含蜡成分太高或脱蜡效果差:可更换二甲苯验证。2)切片经烤片,冷却后放入二甲苯脱蜡或室温太低;延长拖拉时间或用热的切片脱蜡验证。3)脱蜡时间太短或振荡太少,幅度太小;可延长脱蜡时间或以多振荡来验证。4)洗涤二甲苯用的乙醇使用时间过久,导致乙醇中二甲苯含量过高,二甲苯残留在切片上(由于二甲苯与水不相溶,切片上有二甲苯的地方,苏木精就没有办法渗透进去,在切片染色完成后留下了点状的不着**域):更换各道乙醇验证。5)二甲苯、乙醇质量不佳(偶有试剂瓶内装的试剂与试剂名不相符):换批号验证。6)更换脱蜡液体时试剂拿错:需重新配置验证。7)更换脱蜡液体时试剂次序放错:需重新配置验证。8)烤片时间短,切片上水分没有烤干,也会导致着色不匀,出现点状发白区域。HE染色规范化流程以及注意事项。湖南值得信赖的HE染色服务
HE染色取材和样本保存方式。西藏专业的HE染色报告
HE染色常见问题:成片的染色模糊不清,灰染答:(1)组织未及时固定,部分自溶;或固定不佳,深部组织未处理到。这种只能重新固定了。(2)尽管乙醇也是一种固定液,但尽量少用或不用,因为其会导致组织发硬变脆,染色效果不好。(3)包埋时蜡的温度过高,或切片后烤片时间和温度过久过高都不好,可能会导致无法染色。(4)脱蜡不彻底;染料有问题;分化过度导致的颜色变淡,镜下组织界限不清;染完后的脱水和透明不佳,水雾残留在组织上。(5)通风窗中(防止空气中的水雾),戴口罩操作封片(减少哈气带来的水雾)。西藏专业的HE染色报告