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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

FucosEXO中的酶在大肠杆菌中表达,带有His标签,分子量为87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然条件下水解糖蛋白上的岩藻糖,在6至8的pH值范围内显示出高活性,无需辅助因子或添加剂。1. 用于方法开发的灵活格式;2. 可以结合酶以提高效率;3. 适用于自动化工作流程;4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-岩藻糖苷酶的混合物,用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游离寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-连接的岩藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集:GlycOCATCH还可用于从复杂的样品混合物(如人血清)中选择性富集O-糖基化蛋白。简而言之,用Genovis的SialEXO处理血清并应用于GlycOCATCH树脂。洗涤树脂,用8M尿素洗脱O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化样品并使用 RP-LC-MS/MS 进行分析,并使用 Swiss Prot 数据库鉴定蛋白质列表。O-糖基化蛋白以黄色表示。SialEXO是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶;陕西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

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Genovis的SialEXO Immobilized是一种微离心柱,用于在室温下孵育30分钟后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。为了研究依那西普的潜在电荷变体,开发了一种使用SialEXO固定化柱对糖蛋白进行去唾液酸化的一般工作流程。毛细管电泳通常用于在生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体。使用SialEXO Imfixedized对糖蛋白进行去唾液酸化,并使用ProteinSimple的Maurice在成像等电聚焦中进行分析。综合起来,该分析工作流程改进了糖蛋白的分离并实现了电荷异构体分析。依那西普,如果不首先去除唾液酸,将很难分析,但使用SialEXO固定化分离峰可以获得。四川PNGaseF去糖基化酶瑞典GenovisGalNAcEXO固定化离心柱用于水解糖蛋白上的GalNAc残基。

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与PNGase F类似,Genvois的OmniGLYZOR用于携带N-和简单O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 试剂盒包括:OmniGlyZOR 微离心柱;PNGase F 冻干;RapiGest™* SF表面活性剂。除非底物蛋白变性,否则某些 N-糖基化位点很难或无法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在变性条件下使用试剂盒中包含的PNGase F冻干和RapiGest™ SF表面活性剂通过额外的去糖基化步骤去除。使用Genovis的OpeRAT对EPO进行O-糖位点特异性消化:对于jin携带一个或几个 O-糖基化位点的简单底物蛋白,OpeRATOR 也可用于绘制中间水平的 O-糖基化位点。

对Genovis的ImpaRATOR处理的样品的分析表明,ImpaRATOR很好地消化了所有三种底物并产生了相似的糖肽,但预期的聚糖种类不同。用ImpaRATOR处理的样品比其他样品含有更多的变异,因为每种肽都检测到多种聚糖结构。观察到的聚糖种类主要是单唾液酸化和二唾液酸化he心1结构,这与依那西普的预期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO预处理样品均产生具有裸核1结构的肽,但携带在ImpaRATOR消化样品中观察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 预处理,然后用 ImpaRATOR 消化,得到含有 Tn 抗原的肽。总之,这些数据证明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR处理的依那西普显示出与相应的去唾液酸化OpeRATOR处理样品略有不同的消化模式。例如,OpeRATOR在两个O-糖基化氨基酸之间消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱(数据未显示)。实现 O-糖谱分析、位点占用测定和 O-糖肽图谱以及使用 LC-MS 分析的中级方法。

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Genvis测试去除唾液酸以揭示电荷变体:唾液酸是带负电荷的糖残基,存在于 N- 和 O-连接的聚糖上。唾液酸的固有电荷可能会使分析工作流程复杂化,从而掩盖其他重要的修饰。Microspin 色谱柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的离心柱;2. 提高酶与底物的比例,提高消化效率;3. 样品中不含酶。因此,唾液酸的去除有助于研究蛋白质中的潜在变体。该应用展示了一种快速简便的样品制备方法,可在电荷异构体分析之前去除所有唾液酸。用于糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的水解,而不会用酶污染z终制剂。江苏冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶

SialEXO冻干由两种唾液酸酶组成,每种唾液酸酶都具有独特的活性,并且它们同时起作用。陕西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

Genovis的PNGase F 是一种糖酰胺酶,可水解多肽天冬酰胺与所有哺乳动物天冬酰胺连接复合物、杂交体或高甘露糖寡糖的内层 GlcNAc 之间的酰胺键。 在反应过程中,从中去除聚糖的天冬酰胺残基被脱酰胺为天冬氨酸。释放的低聚糖完好无损,可用于进一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的样品制备,以降低蛋白质的异质性,使游离的糖分析成为可能,并研究N-糖的功能作用。 该酶在大肠杆菌中表达,该重组基因来源于伊丽莎白金氏脑膜败血症。 评价抗体片段对完整蛋白聚集的影响。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生产。 mAb1被糖基化,主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦双触角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。陕西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究

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