英瀚斯生物为您整理免疫组化实验步骤
1、石蜡切片置于65℃烘箱中烘片2h，脱蜡至水，用PBS冲洗三次，每次5min。
2、切片置于EDTA缓冲液中微波修复，中火至沸后断电，间隔10min低火至沸。
3、自然冷却后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。
5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。
6、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。
7、PBS洗3次，每次5min。
8、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。
9、PBS洗3次，每次5min。
10、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。
11、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
12、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 免疫组化技术的原理、分类和优点！江苏大鼠免疫组化要多少钱
免疫组化的发展路程？在临床病理诊断中，免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断cancer、cancer分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及cancer形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥比较大的辅助作用。如果您有免疫组化相关的实验，可以与我们英瀚斯生物进行联系。江苏大鼠免疫组化要多少钱英瀚斯生物，专业病理染色切片平台，免疫组化效果好！
免疫组化分类中免疫酶标方法，英瀚斯生物为您介绍。免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，目前在病理诊断中广为使用的当属***法（过氧化物酶-抗过氧化物酶）、ABC法（卵白素-生物素-过氧化物酶复合物）、SP法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）、即用型二步法（聚合物链接）等。
免疫组化如何才能充分脱蜡？
（1）蜡不溶于水，如果脱蜡不干净，少许蜡存留于切片上，将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题，切片在染色前必须彻底脱蜡，目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯，因它脱蜡力强，脱蜡时间较短；
（2）脱蜡的时间要根据季节，室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天，室温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5分钟就已足够。如果在冬天，室温较低，脱蜡试剂也较陈旧，则脱蜡时间需要延长，10-20分钟或更长。
（3）当天切的切片，烧烤2小时后进行染色，切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程，如果预先切好烤好的切片，在染色前，还必须对切片进行加温10-20分钟，然后再行脱蜡，这样脱蜡速度加快，效果魁伟更好。总之，操作时应根据不同的季节，不同的室温，不同的试剂来决定，脱蜡的时间，原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。
切片染色更多问题汇总，关注英瀚斯生物。 免疫组化样本如何处理？
目前几种常用免疫组化方法简单介绍
1）免疫荧光方法是**早建立的免疫组织化学技术。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用较广。它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。
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2）免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前**常用的技术。本方法与免疫荧光技术相比的主要优点是：定位准确，对比度好，染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速，已经衍生出了多种标记方法，且随着方法的不断改进和创新，其特异性和灵敏度都在不断提高，使用也越来越方便。目前在病理诊断中广为使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法检测系统等。
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免疫组化技术应用于临床cancer良恶性的判断，英瀚斯生物为您介绍。对于反应性增生还是cancer性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。在滤泡反应性增生时，滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2阴性;而在滤泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性滤泡细胞有bcl-2的高表达，bcl-2阳性。而增殖细胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通过对cancer细胞增生的程度作出评价，从而提示增生细胞的良恶性。江苏大鼠免疫组化要多少钱
