离心管就是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,目前较常用的就是Millipore的。目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理。超滤离心管的选择主要看你要截留那部分物质,就选择比较小分子量小的,如果你要截留26KD的,你要的超滤管就要比26小。但两者也要有一定的差距,比如,选择20-25KD之间的就不合适,因为26的也可能会出去(这是由制造工艺决定的)。所以选择20KD以下的超滤管比较合适。使用超滤离心管时应注意选择正确的膜孔径,以确保所需分子能通过筛选过程。深圳离心管厂家
可以通过多个超滤管同时超滤来降低浓度,而后者通过改变不同的缓冲液直到没有蛋白质沉淀。用来浓缩蛋白质的。如果要更换缓冲液,当总蛋白溶液浓缩到1毫升左右时,轻轻添加一个新的缓冲液〈用0.22um超滤膜超滤后〉,然后连续浓缩到1毫升左右。浓缩液的之后体积取决于所需的蛋白质浓度,通常不超过500 ul,但也要浓缩到200 ul以下。根据每次至少10次的体积浓度计算,1000次以上的3次基本可以达到更换缓冲器的目的。提取之后浓缩蛋白的操作在冰上进行。黄色设备头(200ul)用于提取之后的蛋白质浓缩物。设备头沿设备头边缘轻轻插入。将蛋白溶液轻轻吹匀。注意不要触摸超滤膜。吸取浓缩液,一次较多吸200 ul,直至耗尽。之后留在管底的浓缩液不需要吸收,否则太困难,可能损坏超滤膜。之后,在无超滤膜的超滤管中加入milliq水,以防止超滤膜干燥。四川蛋白分离离心管工厂超滤离心管是一种经济、有效且环保的分离技术,具有普遍应用前景。
根据其大小,又分为1.5ml、2ml、5ml、10ml、15ml、50ml等,国产的离心管一般就是这几个规格,用的较多的也就是10ml和50ml的。如果您的离心机是配30ml或者其他规格的离心管时,就要考虑进口的了。另外,离心管还有圆底和尖底,以及螺旋盖和插盖之分。螺旋盖的离心管带有较精细的刻度,插盖的只有一个总体的容量标示。实验室常用的离心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用的较多,因为玻璃的离心管不能用在高速或者超速离心机上。塑料的离心管又有PP(聚丙烯)、PC(聚碳酸酯),PE(聚乙烯)等材质。PP的管子性能相对来说比较好。塑料的离心管透明或者半透明,可以直观的看到样品离心情况,但是比较容易变形,抗有机溶剂的腐蚀性较差,所以使用寿命较短。因此,实验室一般会经常购买离心管。
超滤离心管通常不需要预处理即可使用,不过对于蛋白质样本处理,特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。虽然PES材料使非特异吸附较小化,但是,某些蛋白,特别是稀的时候,会有问题。非特异结合的程度随着个别蛋白结构的不同而不同。含有带电的或者疏水结构域的蛋白质更易于不可逆结合到不同表面。对超滤离心管表面做钝化预处理可降低蛋白质在膜表面的吸附性损失,大多数情况下,在浓缩稀蛋白溶液之前预处理柱子可以提高回收率,因为溶液可填满膜和表面暴露的空白蛋白吸附位点。钝化的方法是预先用较高容积的钝化溶液预浸泡柱子1小时以上,蒸馏水彻底冲洗柱子,再用蒸馏水离心一次以彻底除去可能残留在膜上的钝化溶液。注意钝化处理后别让膜干了。如果要留待以后使用,需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。超滤离心管是一个快速、便捷的方法来从混合物中分离和提取大分子,如蛋白质、核酸等。
离心技术主要用于各种生物样品的分离和制备,生物样品悬浮液盛放在离心管中在高速旋转下,由于巨大的离心力作用,使悬浮的微小颗粒(如细胞器、生物大分子的沉淀等) 以一定的速度沉降,从而与溶液得以分离。而离心管就是离心试验中必备的实验耗材之一。含有带电的或者疏水结构域的蛋白质更易于不可逆结合到不同表面。对超滤离心管表面做钝化预处理可降低蛋白质在膜表面的吸附性损失,大多数情况下,在浓缩稀蛋白溶液之前预处理柱子可以提高回收率,因为溶液可填满膜和表面暴露的空白蛋白吸附位点。钝化的方法是预先用较高容积的钝化溶液预浸泡柱子1小时以上,蒸馏水彻底冲洗柱子,再用蒸馏水离心一次以彻底除去可能残留在膜上的钝化溶液。注意钝化处理后别让膜干了。如果要留待以后使用,需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。超滤离心管可以通过调整旋转速度、温度等参数来控制分子筛选效果。四川蛋白分离离心管工厂
超滤离心管通常由聚碳酸酯等材料制成,可承受高速旋转和高温高压。深圳离心管厂家
市场上常见离心管主要分为两种:即:塑料离心管 和玻璃离心管,也有少数是钢制离心管。使用玻璃管时离心力不宜过大,需要垫橡胶垫,防止管子破碎,高速离心机一般不选用玻璃管。离心管盖子封闭性不够好,液体就不能加满(针对高速离心机且使用角转子)以防外溢,失去平衡。外溢后果是污染转子和离心腔,影响感应器正常工作。超速离心时,液体一定要加满离心管,因为超离需要抽高真空,只有加满才能避免离心管变形。而钢制离心管强度大,不变形,能抗热,抗冻,抗化学腐蚀,它的应用也是相当普遍但使用时同样也应避免接触强腐蚀性的化学药品,如强酸、强碱等。尽量避免这些化学物质的腐蚀。深圳离心管厂家