5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一种胺活性衍生物的荧光染料,具有广泛的应用,作为抗体和其他探针标记,用荧光显微镜,流式细胞仪、免疫荧光方法如ELISA和Western印迹实验。荧光素衍生物具有高吸收率、优异的荧光量子产率和良好的水溶性,是流式细胞仪和免疫荧光中生物检测**常用的荧光标记之一。**常用的荧光素包括用于标记蛋白质(特别是抗体)的异硫氰酸荧光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于标记肽和寡核苷酸的羧基荧光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于荧光素的染料、底物和偶联物,以及一系列具有针对细胞标记和检测优化的特性的质量iFluor™荧光标记染料。动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。北京荧光染料DID
异硫氰酸荧光素(FITC)是一种有机荧光染料,目前,这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。在495/517nm处,该染料会产生激发/发射峰值,并可借助异硫氰酸盐反应基团与不同抗体结合,该基团可以和蛋白质上的氨基、巯基、咪唑、酪氨酰、羰基等基团相结合。而它的基本成分——荧光素,其摩尔质量为332g/mol,常被用作荧光示踪剂。FITC(389g/mol)是用于荧光显微镜技术的首批染料,且其被当成AlexaFluor®488等后续荧光染料的发端。该染料的荧光活性取决于它的大共轭芳香电子系统,而该系统受蓝色光谱中的光所激发。经常与FITC同时使用的另一种染料是与其相似的TRITC[四甲基罗丹明-5(6)-异硫氰酸]。与FITC相反,TRITC并非荧光素,而是罗丹明家族的衍生物。罗丹明也具有一个大的共轭芳香电子系统,正是该系统引发了它们的荧光行为。还有一点与FITC相反,TRITC(479g/mol)由比较**长为550nm的绿色光谱中的光所激发,它的比较大发射波长为573nm。与蛋白质(例如,抗体)结合也基于异硫氰酸盐反应基团。杭州荧光染料蓝色花青类荧光染料属于共振染料,其特征在于具有离域电荷的氮原子(两个氮原子)之间的聚甲炔染料。
罗丹明属于呫吨族。与市场上的许多其他染料相比,罗丹明具有出色的光稳定性以及许多光物理特性,使其非常适合用作激光染料、荧光探针和颜料。它们在聚合物纳米粒子表面的表征、聚合物-生物偶联物的检测、活细胞的成像以及寡核苷酸在胶乳上的吸附分析等方面特别有用。罗丹明荧光染料的衍生物也用作:分子开关,病毒表面修饰,化学传感器,硫醇。不同类型的染料通过它们各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)来区分。由于它们的差异,这些荧光染料在溶液中也表现出不同的光物理特性(例如不同的荧光寿命和发射比较大值)。氨基被刚性化的罗丹明染料无论温度范围如何都表现出高量子产率,而在每个氮处具有两个烷基取代基的那些表现出活化的内部转化,量子产率和荧光寿命随温度的变化而变化。罗丹明101和罗丹明B是一些**常用的罗丹明染料具有以下特点:--羧基倾向于在酸性溶液中质子化--染料转化为两性离子碱性溶液--两性离子染料在极性较小的有机溶剂中变为无色内酯要将罗丹明用作荧光探针,必须对其进行修改。这可以通过(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基环或羧酸基团的修饰来实现。与TRITC一样,罗丹明(NHS-rhodamine)的荧光特性为544nm(比较大吸收波长)和576nm(比较大发射)。
InvitrogenCy3染料是一种明亮的橙色荧光染料,可使用532nm激光线激发,并使用TRITC(四甲基罗丹明)滤光片组进行可视化。除了免疫细胞化学应用,Cy3染料通常用于标记核酸。发光说明:Cy3荧光团也是亲脂性神经元和长期DiI细胞追踪试剂的基础,该试剂添加烷基尾(≥12个碳)添加到**荧光团上。Cy3染料是用于成像、流式细胞术和基因组应用的蛋白质和核酸结合物的传统橙色荧光标签。它也是经典亲脂性示踪剂DiI及其变体的基础。根据化学结构,Cy3可分为普通Cy3(常简称Cy3)和磺化Cy3(Sulfo-Cy3)。Cy3水溶性较低,在水相标记反应时常常需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。磺化Cy3是在Cy3的结构基础上磺化的产物,附带2个或3个磺酸根离子。由于磺化效应,磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮,荧光稳定性也提高,可赖受更长时间的曝光。磺化Cy3水溶性极高,所以在标记反应中不需要使用有机共溶剂,特别适合标记蛋白等对有机溶剂敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性极好,并且染料分子本身带电荷,标记到蛋白表面后不会引发疏水性蛋白聚集,提高荧光标记产物的稳定性。当然,磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇,DMSO,DMF等有机溶剂,标记反应也可以在纯有机溶剂中进行。南京星叶生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列)。
CY7是一种CY染料。CY为花菁(Cyanine)的缩写,是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。菁类化合物具有波长长、吸收和发射可调、消光系数高的特点CY系染料常被用于蛋白、抗体以及小分子化合物的标记,对于蛋白抗体的标记,可以通过简单的混合反应来完成结合,下面我们介绍了蛋白抗体标记的标记方法,具有一定的参考意义。一、比较好蛋白制备1)为获得标记效果,请制备蛋白(抗体)浓度为2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值为8.5±0.5。如果pH值低于8.0,应使用1M3)如果蛋白浓度低于2mg/mL,标记效率会**降低。为获得比较好标记效率,建议**终蛋白浓度范围为2-10mg/mL。4)蛋白必须在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的缓冲液中,和铵离子,否则会影响标记效率。2.染色制备(以CY3-NHS酯为例)将无水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中,制备成10mM储备液。通过移液器或涡旋混合均匀计算。使用前需先使用缩合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一个可进行后续标记实验。PI常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。北京荧光染料DID
Cy7 DiC18(DiR)是一个亲脂性、近红外荧光花青染料,这个染料常用于标记细胞质膜。北京荧光染料DID
PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。2.染色过程(1)将1/10培养基体积的PI染色液加入到细胞培养基中(也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基)。(2)在37℃培养细胞10~20分钟。(3)用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。(4)用535nm激发波长,615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事项:PI对人体有刺激性,请注意适当防护。北京荧光染料DID