作为免疫系统的重要组成部分，IgA在自身免疫性疾病、过敏反应、胃肠道疾病等许多不同的健康状况中发挥作用。在天然条件和复杂生物样品中选择性和特异性消化IgA的能力在临床医学和研究中具有重要价值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候选物样品复杂性并简化IgA分析表征的宝贵工具。人IgA1和IgA2之间的一个显着结构差异是铰链区域。与IgA2相比，IgA1具有更长的富含O-聚糖且更灵活的铰链区域。IgASAPSub1的消化位点位于该扩展区域，使酶具有IgA1特异性。IgA2亚类以三种等位基因形式存在，A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸（P）和缬氨酸（V）之间消化IgA1和IgA2m1只有N端到铰链区域，但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸残基被精氨酸（R）残基取代，因此这两种同种异体型的IgA2对消化具有抗性。可在铰链上方的一个特定位点消化人 IgA1，产生完整且均质的 Fab 和 Fc 片段。江苏FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学
与IdeS不同，为了获得更均匀的度拉糖肽融合蛋白的消化产物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白质消化该蛋白质，该蛋白由与琼脂糖珠共价偶联的GlySERIAS酶组成。通过将酶偶联到树脂上，可以增加酶与蛋白质的比率，从而可以进一步加速反应，以获得更完整的连接子消化。此外，该酶不会存在于样品制备中，可能会干扰样品分析。为了进行比较，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化过夜，或用GlySERIAS冻干1小时并在37°C下过夜消化。 为了降低样品复杂性，使用内切糖苷酶GlycINATOR冻干去除Fc聚糖，并减少链间二硫键。通过反相LC-MS对样品的分析表明，GlySERIAS Immobilized几乎完全消化了Fc结构域中的连接子，留下了接近均质的Fc/2产物，其中含有来自连接子的一个丝氨酸残基。用 GlySERIAS 冻干 1 小时或过夜消化，两者都会产生几种 Fc 产物，并附着不同数量的丝氨酸和甘氨酸残基。GLP-1肽在所有三个样品中以两种变体存在。使用GlySERIAS固定化消化的均质Fc/2能够详细研究特定于Fc区域的质量属性。此外，在样品中未观察到干扰分析的酶峰。作为补充，Fc/2 产物在用 GlySERIAS 冻干消化后残留部分连接子，有助于研究位于 GS 连接子的修饰。天津FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗体酶切FabRICATOR Magic磁珠化IdeS酶切的自动抗体亚基分析可减少操作人员的时间和样品处理错误的风险。
Genovis提供色谱柱形式的FabRICATOR（IdeS）酶，是在铰链下方对IgG进行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶，可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。酶解后，可以使用反相HPLC、质谱或其他分析方法分析片段。抗体消化和亚基生成的自动化使生物反应器的在线监测应用成为可能，例如，作为2D-LC-MS设置的一部分，将反应器直接耦合到MS。这种自动化的抗体亚基分析方法减少了操作人员的时间、样品处理时间并提高了通量。
为什么客户想在他们的工作试用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特异性(在铰链下方有单个消化位点)以及它对IgG种和亚类表现出活性的事实使其成为高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大优势是速度。在大多数IgG上，您可以在短短30分钟内生成F(ab’)2和Fc/2片段，这一速度简化了方法开发，并允许快速有效的中层表征，使客户能够在不比做完整质量实验长太多的时间内获得更多关于分子的信息。Genovis发现更多的缓冲液与溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已经测试了PBS和150mM醋酸铵，pH7，结果良好。并且应该也适用于FabRICATORHPLC。然而，缓冲液的离子强度会影响抗体片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色谱柱上的保留，并且IgG1亚基需要至少100-150mM盐才能洗脱为单个窄峰。其他IgG亚类或融合蛋白可能需要对缓冲液组成进行一些优化。Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS蛋白酶）试剂盒可消化兔 IgG。
Genovis除了提供IdeS酶以外，还提供很多种特异性蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）。IgdE 在铰链正上方的一个特定位点消化人 IgG1，产生完整的 Fab 和 Fc 片段的均质池。它在pH值和盐浓度范围内具有活性，不需要任何还原剂或辅助因子。因此，与许多其他常用的蛋白酶相比，FabALACTICA不需要任何优化来避免过度消化。这使得FabALACTICA成为一种有吸引力的酶，例如在还原和非还原条件下的LC-MS分析、抗体高阶结构（HOS）的结晶和NMR研究、双特异性或多特异性抗体的表征、单价结合研究和完整的Fc聚糖分析。在抗体药及核酸药领域，倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程，抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。安徽FabALACTICAIdeS蛋白酶抗体酶切
反相LC-MS对样品的分析表明，使用Genovis的GlySERIAS进行度拉糖肽的连接子消化后，肽从Fc区域完全去除。江苏FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学
与IdeS不同，Romiplostim 由四个相同的血小板生成素 （TPO） 受体结合肽和一个 Fc 片段组成，通过柔性聚甘氨酸序列连接在一起。与度拉糖肽类似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下过夜，或用 GlySERIAS 冻干 1 小时并在 37°C 下过夜消化该蛋白质。 链间二硫键被还原，以便于通过反相LC-MS进行以下分析。与度拉糖肽的观察结果类似，用固定化酶消化产生均质的 Fc/2，剩下一个连接子残基，此处为甘氨酸残基。这有助于识别专门位于Fc区域的修改。用冻干酶消化 1 小时得到 Fc/2，剩余 4 个甘氨酸残基和少量的 Fc/2 仍与一个 TPO 肽连接。另一方面，这使得研究 Fc/2 和第yi个肽之间的连接区域成为可能，而不会受到第二个肽的干扰。用 GlySERIAS 冻干液过夜消化产生 2 个 Fc/2 变体，分别剩下 4 个和 1 个甘氨酸残基。根据消化时间的不同，使用冻干产物释放的肽以五或七种变体存在，接头中残留的甘氨酸残基数量不同，而使用固定化产物释放的肽以四种变体存在。江苏FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白组学
经过多年的经验积累及市场积淀，倍笃生物已组合多条不同产品线，分别满足体外诊断、organoid及干细...
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