稳定转染方法:1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。近期还有PEIfree申请活动,欢迎咨询上海曼博生物!欢迎关注我们的公众号Mine-bio,回复“PEI转染试剂”即可领取!使用PEI转染试剂时出现沉淀是什么原因?线性PEI转染试剂
瞬时转染方法:1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果:在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。还有PEI试用装申请活动,关注公众号:Mine-bio,私信回复:PEI申请,即可参加不同分子量PEI转染试剂运输方式有哪些比较好的转染试剂呢?
稳定转染方法:1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于PEI转染试剂相关产品技术问题,欢迎咨询上海曼博生物!也欢迎关注我们的公众号:Mine-Bio
PEIMAX——高产工业化转染试剂-高度浓缩,可制备大量转染试剂Polysciences转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)的产品,因其较高的转染效果,已广泛应用于工业化生产。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔二个碳原子,即每“第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(protonsponge)体。PEI可用作转染试剂,它可以缩聚DNA分子形成颗粒并转染真核细胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成线性聚乙烯亚胺瞬时转染试剂。PEIMAX是一款高度浓缩的粉剂,大量科学家选择PEIMAX,在内部自行制备低成本高效益的PEI转染试剂。多年以来,经过众多业内人士评审的公开研究和出版文献表明,在HEK293、CHO和Sf9系统中可获得很高的转染效率,在重组抗体和病毒载体生产中稳定性高,可靠性强。PEIMAX提供从96孔板到200L生物反应器持续的高基因表达细胞体系,实现从新药研发到工业化生产的轻松过度。而且与大多数细胞转染方案相比,使用PEIMAX至少可降低40%转染成本(部分案例可降低90%转染成本)。使用PEI转染试剂时出现沉淀是什么原因?
细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法:生物转染,物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体,以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因,无论哪一种都需要特定的设备,且一分钱一分货,性能好的价格也都相对较高。更多关于PEI转染试剂相关产品技术问题,欢迎咨询上海曼博生物。有哪些不错的PEI转染试剂?不同分子量PEI转染试剂用途
PEI转染试剂有没有毒性?线性PEI转染试剂
对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。更多关于PEI转染试剂相关产品技术问题,欢迎咨询上海曼博生物!也欢迎关注我们的公众号:Mine-Bio线性PEI转染试剂
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【详情】抗体药物研发客户提供小众创新产品,包括从Researchgrade到cGMP等级的无动物源培养基质,...
【详情】1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板...
【详情】1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板...
【详情】产品特点:PEIMAX40K是线性聚乙烯亚胺盐酸盐形式(LinearPolyethylenimine...
【详情】注意事项质粒质量:请务必使用高质量转染级无内质粒(推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒...
【详情】注意事项质粒质量:请务必使用高质量转染级无内质粒(推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒...
【详情】上海曼博生物医药科技有限公司始终致力于为客户提供一站式生物医药科技服务,以创新和为价值理念,通过自身...
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