Sternand Jean Marx在评论中说:祖家能够在更为精细的层次研究树突的功能,这在以前是完全不可能的。新的技术(如脑片的膜片钳和双光子显微使人们对树突的计算和神经信号处理中的作用有了更好的理解。他们解释了是树突模式和形状多样性,及其独特的电、及其独特的电化学特征使神经元完成了一系列的专门任务。双光子与共聚焦在发育生物学中的应用双光子∶每2.5分钟扫描一次,观察24小时,发育到桑椹胚和胚泡阶段共聚焦∶每15分钟扫描一次,观察8小时后细胞分裂停止,不能发育到桑椹胚和胚泡阶段共聚焦激发时的细胞存活率为多光子系统的10~20%。多光子显微镜,实现无创、无标记的生物组织观测方案。美国进口多光子显微镜系统
多光子显微镜成像深度深、对比度高,在生物成像中具有重要意义,但通常需要较高的功率。结合时间传播的超短脉冲可以实现超快的扫描速度和较深的成像深度,但近红外波段的光本身会导致分辨率较低。基于多光子上转换材料和时间编码结构光显微镜的高速超分辨成像系统(MUTE-SIM)是由清华大学教授和北京大学彭研究员合作开发的。可实现50MHz的超高扫描速度,突破衍射极限,实现超分辨率成像。与普通荧光显微镜相比,该显微镜经过改进,只需要较低的激发功率。这种超快、低功耗、多光子超分辨率技术在高分辨率生物深层组织成像中具有长远的应用前景。美国布鲁克多光子显微镜原理多光子显微镜是一种强大的显微镜技术,具有广泛的应用前景和发展潜力。
对于两个远距离(相距1-2mm以上)的成像部位,通常采用两个**的路径进行成像;对于相邻区域,通常使用单个物镜的多个光束进行成像。多光束扫描技术必须特别注意激发光束之间的串扰,这可以通过事后光源分离或时空复用来解决。事后光源分离法是指分离光束以消除串扰的算法;时空复用法是指同时使用多个激发光束,每个光束的脉冲在时间上被延迟,使不同光束激发的单个荧光信号可以暂时分离。引入的光束越多,可以成像的神经元越多,但多束会导致荧光衰减时间重叠增加,从而限制了分辨信号源的能力;并且复用对电子设备的工作速度要求很高;大量的光束也需要较高的激光功率来维持单束的信噪比,这样容易导致组织损伤。
多束扫描技术可以同时对神经元组织的不同位置进行成像。该技术:对于两个远程成像位置(相距1-2mm以上),通常采用两个**的路径进行成像;对于相邻区域,通常使用单个物镜的多个光束进行成像。多光束扫描技术必须特别注意激发光束之间的串扰,这可以通过事后光源分离或时空复用来解决。事后光源分离法是指分离光束以消除串扰的算法;时空复用法是指同时使用多个激发光束,每个光束的脉冲在时间上被延迟,使不同光束激发的单个荧光信号可以暂时分离。引入的光束越多,可以成像的神经元越多,但多束会导致荧光衰减时间重叠增加,从而限制了分辨信号源的能力;并且复用对电子设备的工作速度要求很高;大量的光束也需要较高的激光功率来维持单束的信噪比,这样容易导致组织损伤。光子显微镜可以观察生物细胞、组织、微生物、纤维等样品,具有分辨率高、成像速度快、操作简单等优点。
Ca2+是一种重要的第二信使,在调节细胞生理反应中起着重要作用。发展和利用双光子荧光显微成像技术观测Ca2+荧光信号,可以从某些方面分析生物体或细胞的变化机制,具有重要意义。利用双光子荧光显微成像技术,我们可以观察到细胞内荧光探针标记的Ca2*的时间和空间荧光图像的变化,也可以观察到一定水平或部分细胞内(Ca2+)的荧光图像和变化。通过对单个细胞的研究发现,Ca2+的分布不仅在细胞的局部区域之间是不均匀的,而且在细胞内不同深度或层次的局部区域之间也存在不同程度的Ca2+梯度,称为空间Ca2+梯度。多光子显微镜可以更好的了解神经信号之间复杂动态的编码过程。美国灵长类多光子显微镜成像区域
由于其非侵入性和高分辨率的特点,多光子显微镜在神经科学、ai症研究、免疫学等领域发挥了重要作用。美国进口多光子显微镜系统
细胞在受到外界刺激时,随着刺激时间的增长,即使刺激继续存在,Ca2+荧光信号不但不会继续增强,反而会减弱,直至恢复到未加刺激物时的水平。对于细胞受精过程中Ca2+荧光信号的变化情况,研究发现,配了在粘着过程中,Ca2+荧光信号未发生任何变化,而配子之间发生融合作用时,Ca2+荧光信号强度却会出现一个不稳定的峰值,并可持续几分钟。这些现象,对研究受精发育的早期信号及Ca2+在卵细胞和受精卵的发育过程中的作用具有重要的意义。在其它一些生理过程如细胞分裂、胞吐作用等,Ca2+荧光信号强度也会发生很的变化。美国进口多光子显微镜系统