免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种经典的用于研究蛋白质相互作用的方法，它基于抗体和抗原之间的专一性作用。该技术主要用于确定两种蛋白质在完整细胞内的生理性相互作用。基本原理：当细胞在非变性条件下被裂解时，细胞内蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留下来。通过利用预先固化在agarose beads上的蛋白质A的抗体来免疫沉淀A蛋白，与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。随后，通过蛋白变性分离，可以对B蛋白进行检测，从而证明两者之间的相互作用。免疫共沉淀实验涵盖样品处理、抗体处理、共沉淀、洗涤及蛋白鉴定，确保精确检测蛋白相互作用。河北CoIP-WB
Co-IP（免疫共沉淀）和ChIP（染色质免疫沉淀）是两种常用于研究蛋白质与DNA或蛋白质与蛋白质相互作用的实验方法。实验原理方面的区别：Co-IP利用抗体与抗原之间的特异性结合，将目标蛋白及其与之相互作用的蛋白一起拉下来，进而研究它们之间的相互作用。而ChIP则是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并通过超声或酶处理将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过抗原抗体的特异性识别反应沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段。中国香港免疫沉淀CoIPCo-IP实验需注重抗体选择、样品准备、条件控制、洗涤充分、抗体浓度与阴性对照，确保准确可靠！
Co-IP（免疫共沉淀）实验操作的要点。1.细胞裂解：确保采用温和的裂解条件，以保持细胞内存在的蛋白间相互作用。使用非变性裂解液进行裂解和洗涤。2.抗体固定：选择经过验证的抗体，以减少假阳性结果。注意抗体与缓冲液的比例，避免抗体稀释过度或过多。3.抗体结合：将抗体与样品混合，确保抗体与目标蛋白充分结合。4.磁珠或琼脂糖添加：将抗体固定的磁珠或琼脂糖加入混合物中，使其与抗体-蛋白复合物结合。5.沉淀：通过磁珠或琼脂糖的沉降，分离出蛋白复合物。6.洗脱：使用洗脱缓冲液将蛋白质复合物从磁珠或琼脂糖上洗脱下来。7.增加洗脱之前的洗涤次数或在免疫共沉淀缓冲液中加入Triton X-100，以降低非特异性结合。遵循这些操作要点，可以确保Co-IP实验的准确性和可靠性，从而得到准确的蛋白质相互作用结果。
Co-IP（免疫共沉淀）实验的内源检测是验证蛋白质相互作用的关键步骤。在进行Co-IP实验的内源检测时，通常的做法是：样品制备：首先，需要收集并制备细胞或组织样品。确保样品的新鲜度，避免蛋白降解。裂解细胞：在适当的裂解条件下，裂解细胞以释放细胞内的蛋白质。这一步骤需要保持非变性条件，以便保留蛋白质间的相互作用。免疫共沉淀：使用特异性抗体将目标蛋白（如X）免疫沉淀下来。如果目标蛋白与预测相互作用的蛋白（如Y）在体内结合，那么蛋白Y也会被一同沉淀下来。洗涤：通过洗涤步骤去除与抗体非特异性结合的杂质，确保沉淀下来的蛋白复合物是特异性的。Western Blot检测：利用特异性抗体检测沉淀下来的蛋白复合物中是否包含预测相互作用的蛋白（如Y）。通过Western Blot的结果，可以观察到预测蛋白Y的存在，从而验证目标蛋白X与蛋白Y之间的相互作用。Co-IP研究蛋白间互作，ChIP研究蛋白与DNA互作，实验原理各具特色！
免疫共沉淀实验步骤主要包括以下五个部分：样品处理：将细胞或组织样品进行裂解，得到待检测的蛋白质混合物，并加入蛋白酶抑制剂以避免目标蛋白被降解。抗体处理：将专一的抗体连接到亲和树脂上，如蛋白A的亲和树脂或蛋白G的亲和树脂，或将蛋白与其特异性抗体结合，新形成的复合物与封闭剂缓慢摇摆在二氧化硅珠上，使碘酸钙交联后节制反应。免疫共沉淀：将有抗体树脂的样品与吸附抗体树脂形成免疫复合物。洗涤：采用洗涤缓冲液对样品进行洗涤，以去除非特异性的蛋白质和杂质，同时尽量避免对复合物的影响。洗涤缓冲液选择对样品不会引起较大影响的缓冲液和洗涤剂。蛋白鉴定：将沉淀的复合物通过SDS-PAGE分离出来，并进行Western blotting检测目标蛋白及其配偶蛋白。另一方面，也可以直接使用质谱分析检测。Co-IP探究蛋白互作，ChIP研究转录调控，各擅胜场，选择需依研究目标！河北CoIP-WB
Co-IP技术利用抗原抗体特异性作用，研究蛋白质相互作用，助力生命科学研究！河北CoIP-WB
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）的局限性主要包括：可能检测不到低亲和力和瞬间的相互作用：低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质之间的相互作用可能检测不到，这可能导致某些重要的相互作用被遗漏。不能确保直接相互作用：免疫共沉淀不能保证沉淀的蛋白复合物是由直接相互作用的两种蛋白组成。两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用。灵敏度限制：免疫共沉淀的灵敏度不如某些其他技术，如亲和色谱，这可能影响到对低丰度蛋白或微弱相互作用的研究。样本纯度要求高：如果将蛋白复合物直接进行质谱分析，需要得到较高纯度和浓度的蛋白复合物样品，这并非易事，并且成本较高。对抗体要求高：用于免疫共沉淀的抗体不是总是与操作相合适，与Western blotting或者 ELISA相比容易出现假阳性反应。河北CoIP-WB
