文章作者按照经典的慢病毒载体生产流程操作,在融化、核酸酶消化、澄清、超滤等步骤留样,分别检测dsDNA浓度及功能性LV病毒滴度。经过分析发现,——去除主要发生在澄清环节,能去除dsDNA的80%-90%;2. M-SAN HQ中盐核酸酶比Benzonase能更高效去除dsDNA,即M-SAN HQ组的TFF回流液中dsDNA残留量是Benzonase组回流液的20%左右;3. LV病毒滴度在澄清环节损失30%-40%;4. M-SAN HQ组的TFF回流液中LV病毒滴度略高于Benzonase组的回流液数据。在150mM NaCl条件下,M-SAN HQ中盐核酸酶的酶切活性达到常规核酸酶的5倍左右。上海等渗条件中盐核酸酶

经典的慢病毒载体(LV)的生产工艺如下,——三质粒系统瞬时转染HEK293细胞系,转染24小时后LV由转染阳性细胞生产并排出到培养上清液中;收获上清培养液后,加入核酸酶去除HCD污染,通过澄清步骤去除大的细胞碎片等杂质;下游纯化步骤分离LV载体,纯化方法包括切向流过滤TFF、色谱纯化及超速离心;纯化后的LV病毒颗粒经过无菌过滤,更换到优化后的配方中,灌装并冷冻保存。每批Car-T生产时取对应量的LV病毒,切忌反复冻融,否则LV病毒会失活。上海等渗条件中盐核酸酶ArcticZymes的产品开发、生产、销售和营销过程均通过ISO13485质量标准的认证。

基因药物是指将外源基因引入靶细胞,纠正或补偿基因缺陷或异常引起的疾病的。这种策略对许多疾病的康复有很大的潜力,包括ai症、神经退行性疾病和心血管疾病。目前已经进行了2000多项基因药物临床试验,大多数载体已被证明是有效和安全的。目前的研究表明,大约64%的基因药物临床试验是为了医治ai症疾病,而最常见的策略是传递抑制cancer生长或杀死cancer的基因。基因药物的关键是使用安全有效的基因传递载体,如病毒载体和非病毒载体。病毒载体是常用的基因导入的方式之一。而腺病毒的载体由于转基因效率高,不受靶细胞是否分裂的限制,容易制备高滴度的病毒载体,在基因药物和免疫领域有更多的应用。
对于含包膜的病毒载体,如慢病毒LV、逆转录病毒RV等,在细胞培养上清液中收获。而M-SAN HQ中盐核酸酶,作为市场上更适合生理盐条件的核酸酶,所以,M-SAN HQ成了包膜病毒载体生产的更好选择。优势在于:1. M-SAN HQ兼容多种细胞培养体系,在细胞培养盐浓度条件下具有更优活性;2. M-SAN HQ酶活更高、酶切速度更快,缩短孵育时间;3. M-SAN HQ能够高效剪切染色质到更小片段,简化下游工艺流程;4. 相比Benzonase,M-SAN HQ用量减少1/2-2/3,降低了酶用量及生产成本。致力于从深海microbe中识别新的冷适应酶,用于分子研究、IVD和biopharma领域。

经过多年的经验积累及市场积淀,倍笃生物已组合多条不同产品线,分别满足体外诊断、organoid及干细胞、细胞基因药物等领域的需求。其中,细胞基因药物领域产品线包含SAN HQ高盐核酸酶及M-SAN HQ中盐核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP级MSC/PSC培养基、GMP级胶原酶、AAV滴度检测产品、工艺杂质及外源污染物残留检测产品、AAV中和抗体蛋白酶等;相关品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德国BASF、德国Sartorius、德国Nordmark、瑞典Genovis、中国君研生物等。M-SAN HQ中盐核酸酶是用Pichia pastoris表达的重组非特异内切核酸酶。江西生理盐条件中盐核酸酶
M-SAN HQ ELISA kit具有高精确度及高准确度。上海等渗条件中盐核酸酶
Mayer等(2023)以measles virus(麻疹病毒,MV)为例,评估了四种不同核酸酶(BenzonaseTM、DeneraseTM、M-SAN HQ中盐核酸酶及SAN HQ高盐核酸酶)对于染色质DNA去除的效果。Vero细胞通过微载体贴壁培养来生产麻疹病毒MV,72hr后收获上清液,使用3µm cellulose filter(Sartorius)过滤后分装多份,置于-80℃保存便于后续使用。在解冻后的上清中调节对应盐浓度,并加入50 U/ml核酸酶,37℃孵育2hr进行消化,消化后留样;将消化后上清液过Capto Core 700 (Cytiva)柱子,收集流穿液,之后洗杂、洗脱,并分别留样。通过SDS-PAGE分析发现,相比Benzonase等传统核酸酶,在生理盐条件下M-SAN HQ中盐核酸酶更高效将染色质DNA剪切成更小片段,甚至将核小体DNA剪切更彻底。上海等渗条件中盐核酸酶
一般来说,生物生产工艺用的核酸酶以BenzonaseTM(BenzonaseTM是Merck的注册商...
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