流式细胞仪集电子、计算机、激光、流体理论于一体,其是进行流式细胞分析的仪器。在功能水平上定量分析和分选单细胞或其他生物粒子的一种检测手段,即是流式细胞术。其能够随上万个细胞进行高速分析,并且可以同时从一个细胞中将多个参数测量出来,下面就让小编带你了解一下其流式细胞仪的基本原理。仪器变得更加小:到目前为止,流式细胞仪的发展的趋势之一即是小型化、便携式。近些年以来,研究的热门方向逐渐转变为微流体流式细胞仪。多波长微型流式细胞仪、用来分离干细胞的光纤耦合微流体流式细胞仪、用来分离干细胞的光纤耦合微流体流式细胞仪以及规格15cm×10cm×10cm、重量为800g的微流体流式细胞仪分别被发明了出来。细胞分析仪不但能够检测身体内脏和组织防御机制,还可以丰富科学家们研究细胞的知识。常州BioTek酶标仪
流式细胞仪的光学检测系统:流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束,垂直照射在样品流上,被荧光染料染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的接收方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号。光电倍增管接收的信号被积分放大反转换为电子信号输入电子信息接收器,传输给与流式细胞仪相连的计算机。常州BioTek酶标仪细胞分析仪常常和细胞培养箱、显微镜等其他装置一起使用。
流式细胞仪的使用方法:1、选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;2、样品测量完毕后,使用去离子水冲洗液流系统;3、因为实验数据存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;4、将所需结果打印出来。流式细胞仪的维护保养:样品要制成单细胞悬液,且对被检测样品的保存时间有要求。
细胞分析仪性能的技术指标:细胞分析仪性能的技术指标主要有荧光分辨率、荧光灵敏度、分析参数多少及分析、分选速度及纯度等。荧光分辨率是指分辨两个相邻峰的Z小距离,通常用变异系数(CV值)来表示。现在市场上主流型号的荧光分辨率小于2.0%,有的甚至在1%之内。荧光灵敏度反映了仪器探测Z小荧光光强的能力,一般用荧光微球上可测出的荧光(FITC)的Z小分子数来表示。目前细胞分析仪可以达到100以内。一般分析速度为500-10000个细胞/s,分选速度控制在1000个细胞/s以下,分选纯度>98%,有的细胞分析仪分析速度可达100000个细胞/s,分选速度可达70000个细胞/s,分选纯度>98%。细胞分析仪可以通过数学方法精细分析细胞,快速地获取大量细胞信息。
对于研究任务量较大的应用领域,可选板式自动进样器模块及时将双手解放出来,节省宝贵的人力资源,且无需增加仪器体积-CytoFLEX板式自动进样器选项能够在短短32分钟完成一块96孔板的分析,在5分钟内即可实现单管和采样板获取之间的切换,便捷的虚拟板布局,配备自定义清洗和混匀功能,可在单板上定义多种试验,可与平底、U型和V型底标准96孔板兼容。应用方案:淋巴亚群免疫功能检测;BrdU细胞增殖;CBA;DC细胞检测;CEN、CTN周期质控品DNA含量检测;CFSE细胞增殖检测。细胞分析仪可以使用多种细胞的样本,如细胞悬浮液、过滤筛、细胞混合物等。常州BioTek酶标仪
细胞分析仪可以通过化学反应、节段反应技术等获取细胞的生化信息。常州BioTek酶标仪
直接免疫荧光染色法和间接免疫荧光染色法为两种主要的染色方法。间接标记是使用特异的无荧光标记的一抗和被检测的标本反应将没有结合的抗体除去,之后将荧光标记的二抗加入,使得含有荧光的抗原-抗体-抗体混合物生成。如此操作除了步骤复杂,还会将大量的时间耗费掉,因此如今这种方法基本上很少使用了。直接标记即是在标记的时候将连接着荧光素的特异性抗体加入,相对而言,此种方法比较简单,所以普遍地应用于各个实验室。对于白血病的免疫分型来说,如TdT,MPO,cCD3,cCD79a的一些胞内抗原的检测就显得尤为重要。使细胞膜通透为胞内染色的要点。常州BioTek酶标仪