离心管就是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。 蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,目前较常用的就是Millipore的。目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用,使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方法和注意事项。离心超滤管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理。超滤离心管的选择主要看你要截留那部分物质,就选择比较小分子量小的,如果你要截留26KD的,你要的超滤管就要比26小。但两者也要有一定的差距,比如,选择20-25KD之间的就不合适,因为26的也可能会出去(这是由制造工艺决定的)。所以选择20KD以下的超滤管比较合适。超滤离心管可用于分离和纯化各种大分子化合物,如蛋白质、核酸、多糖等。广州浓缩超滤离心管选择
回收浓缩液主要有两种方法:一种是用吸管直接吸取并回收,另外一种是将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中,加盖保存,因此超滤管常配合离心机使用。超滤管主要应用有以下几个方面:1.浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸(单株或双株DNA/RNA样本)、微生物、洗出液和净化样本的生物标本。2.净化组织培养基提取液和细胞溶解液中的大分子成分,从反应混合页中去除引物、链接或分子标记,在HPLC之前去除蛋白质,3.除盐、更换缓冲液或渗滤。根据其材质的不同总体可以分为塑料和玻璃的,塑料的离心管用的较多,又可以分为PP、PC、PS等,根据不同需要,生产厂家会选择不同的塑料材料来进行制作。苏州超滤离心管售价超滤离心管可以通过配合其他实验室设备使用,如高速冷冻机、凝胶电泳仪等来达到更好的效果。
当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。
超滤离心管通常不需要预处理即可使用,不过对于蛋白质样本处理,特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。虽然PES材料使非特异吸附较小化,但是,某些蛋白,特别是稀的时候,会有问题。非特异结合的程度随着个别蛋白结构的不同而不同。含有带电的或者疏水结构域的蛋白质更易于不可逆结合到不同表面。对超滤离心管表面做钝化预处理可降低蛋白质在膜表面的吸附性损失,大多数情况下,在浓缩稀蛋白溶液之前预处理柱子可以提高回收率,因为溶液可填满膜和表面暴露的空白蛋白吸附位点。钝化的方法是预先用较高容积的钝化溶液预浸泡柱子1小时以上,蒸馏水彻底冲洗柱子,再用蒸馏水离心一次以彻底除去可能残留在膜上的钝化溶液。注意钝化处理后别让膜干了。如果要留待以后使用,需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。超滤离心管还可以用于检测样品中的微生物或细胞,并进行分析和研究。
超滤离心管使用方法和注意事项:1、选择合适的超滤离心管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤离心管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤离心管。2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤离心管需要插在冰上预冷。3、质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速rpm换算成g之后,有所不同。离心机的加速度调至低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法*时间处理,后果不可预测!超滤离心管可以用于制备高纯度的DNA、RNA等核酸分子,以进行基因测序和功能研究。安徽离心管哪里能买
超滤离心管通常需要在低温条件下进行操作,以避免目标分子被破坏或失活。广州浓缩超滤离心管选择
超滤离心管,备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用。 使用注意事项 (1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。 (2)新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。 (3)平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同。离心机的加速度调至较低档,减小对膜的压力。广州浓缩超滤离心管选择
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