CUT&Tag 是蛋白质-DNA互作关系研究的新方法,相较于传统的 ChIP-Seq 具有以下优点:省时高效、所需的细胞量少、背景信号低、可重复性好等优点,甚至可用于单细胞水平测序。CUT&Tag 有望将蛋白与染色质 DNA 互相作用的研究变成了一种类似 PCR 反应的常规操作,对基因调控、表观遗传等领域的研究具有**性的意义。 在生物学研究中,DNA 与蛋白质之间的相互作用(DNA-Protein Interaction, DPI)是至关重要的,基因的表达、调控、复制、重组和修复,RNA的转运、翻译和调控,都离不开 DPI,几乎所有的生命活动都会涉及 DPI。通过Klenow酶修复转座产物的末端缺口。山西文章 表观遗传组测序介绍
全基因组重亚硫酸盐测序法(Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS)一度是 DNA 5mC 测序的金标,可以将未经化学修饰的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U),并在后续的扩增和测序过程中被读取为胸腺嘧啶(T),同时保持甲基化修饰的 5mC 和羟甲基化修饰的 5hmC 在测序中仍被读取为 C。然而,WGBS 法需要极端的温度和化学环境,容易造成 DNA 的断裂降解;并且,WGBS 法对未经化学修饰的胞嘧啶(C)具有高比例的破坏力,致使 GC 富集区相比于 AT 富集区更容易丢失,在测序文库中造成“GC 覆盖度偏误”。 由于 ctDNA 含量低、稳定性差,若采用 WGBS 法对 ctDNA 进行 5mC 测序,将会难以避免地带来很多负面影响: 经化学处理后所得的 DNA 总量低,难以满足测序文库所需的量; DNA 丢失严重,覆盖度低,容易造成测序缺口(gap); GC 检测覆盖程度不均一,未能反应真实情况。山东修饰表观遗传组测序案例云序生物强大生物信息团队,满足客户个性化数据分析要求。
DNA甲基化是基因组一种主要的表观遗传修饰形式,它能够调控基因表达、染色质稳定性、X染色体失活及抑制病毒和外源基因的表达等生物过程,与人类的ai症、衰老、老年痴呆等许多疾病密切相关,是表观遗传学研究中的热点之一。云序生物提供新一代的DNA甲基化芯片IlluminaInfiniumMethylationEPICBeadChip测序服务(下文中以850K芯片代称)。850K甲基化芯片有效的利用高通量筛选技术,不但实现基因区域和CpG岛的覆盖,还包括CpG岛之外的甲基化位点、在人类干细胞中鉴定出了非CpG甲基化位点、miRNA启动子区域、以及tumsor和正常组织中差异表达的甲基化位点等。普遍应用于ai症、tumsor和其他复杂疾病的研究,是目前适合表观基因组全关联分析研究的全基因组DNA甲基化芯片。
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目前也习惯将巨大的环状DNA(>1Mb)称为ecDNA。山西文章 表观遗传组测序介绍
多次实验之间的一致性更高 EM-seq 文库在不同起始量之间的相关性都很高,表明 EM-seq 检出的数据具有很好的可重复性,且甲基化检测灵敏度不会随着起始量的减少而降低;相形之下,不同的 WGBS 文库之间的相关性就不够理想。更精准地检测转录起始位点的甲基化数据 在低表达基因的转录起始位点附近,胞嘧啶一般会发生甲基化修饰,但由于 WGBS 法倾向于低估 GC 区域,因此难免遗漏一些转录起始位点附近的甲基化修饰;EM-seq 因为其出色的 GC 覆盖均一性,可以更精准地检测转录起始位点的甲基化数。山西文章 表观遗传组测序介绍
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