CUT&Tag技术的基本原理为:在抗体引导下,ChiTag酶在目的组蛋白修饰标志、或转录因子、或染色质调控蛋白结合染色质的局部进行目的DNA的片段化,同时添加测序接头,并释放到细胞外,而绝大部分无关的染色质还留在细胞核内,因而整个实验的信噪比大幅提高,同时简化了实验步骤。该方法可一管式高通量应用,并可与单细胞测序平台"无缝"结合。ChiTag酶在打断基因组的同时加上接头,不需要繁琐的补平加A加接头,在一个工作日内可以完成从细胞到测序文库制备全流程。还在tumsour发生和发展机理研究中发挥着重大的潜在价值。湖北研究表观遗传组测序案例
ATAC测序的全称是AssayforTransposaseAccessibleChromatinusingsequencing,运用测序手段研究转座酶可接近的染色质的一种技术。该技术通过转座酶对某种特定时空下开放的核染色质区域进行切割,进而获得在该特定时空下基因组中活跃转录的调控序列。这项技术只需少量细胞便可获得实时全基因组活性调控序列信息,应用于转录因子结合分析、核小体定位、活性调控元件分布等研究,在表观遗传机制研究领域有广阔的应用前景。云序生物对染色质开放区域进行研究的技术是利用ATAC测序技术,其原理为:利用DNA转座酶可以携带DNA去识别染色质开放区域。人为地将携带已知DNA序列标签的转座复合物(即带着测序标签的转座酶),加入到细胞核中,再利用已知序列的标签进行建库后测序,从而识别染色质的开放区域。服务表观遗传组测序是什么客户只需提供血清血浆,云序生物为您完成环状DNA富集,甲基化位点转化。
CUT&Tag技术研究蛋白质-DNA互作的优势原文:CUT&Tagforefficientepigenomicprofilingofsmallsamplesandsinglecells期刊:NatureCommunications发表时间:20190429影响因子:11.878在生物学研究中,DNA与蛋白质之间的互作是至关重要的,参与基因的表达、调控、复制、重组和修复以及RNA的转运、翻译和调控等多个过程,几乎涉及所有的生命活动。目前研究两者互作的方法很多,作者选择了传统的研究手段ChIP-seq,优化的CUT&RUN方法,以及新方法CUT&Tag共同研究组蛋白H3K27me3。通过比对实验结果,发现CUT&Tag有低的背景噪声以及强的信号。通过对H3K4me1修饰物进行分析,显示CUT&Tag的灵敏度高,实验可重复性好。
案例2:鼻细胞表观基因甲基化作为儿童哮chuan和气道炎症生物标志物的研究期刊:NatureCommunication影响因子:11.878本文作者研究团队首先借助850K甲基化芯片平台对547名儿童鼻孔细胞表观基因组做了DNA甲基化检测分析,并对当前的哮chuan、变应原致敏、变应性鼻炎、呼出气一氧化氮(FeNO)和肺功能进行了鼻表观基因组关联分析(EWAS)。结果显示DNA差异甲基化主要发生在哮chuan相关基因、参与Th2和嗜酸性反应的基因、以及可能改变呼吸上皮的通透性和功能的基因。作者还发现发现随着过敏和哮chuan生物标志物的升高,表观遗传年龄会加速。综上所述,鼻细胞外基因组甲基化可以作为哮chuan、过敏和气道气道炎症的敏感生物标志物,以及这些表型的特异性生物学过程。游离于染色体基因组之外的DNA被发现常常以环状的形式存在,这种形式的DNA被称为eccDNA。
本文作者利用850K芯片分别检测健康表皮、光化性角化病表皮、皮肤鳞状细胞ai表皮的DNA甲基化状态,发现AK甲基化显示出经典的tumsor甲基化的结构与cSCC的结构高度相似,通过降低DNA甲基化年龄、非CpG岛甲基化、干细胞相关的角蛋白和增强子甲基化模式进一步分析,证实了干细胞甲基化的典型特征。同时还发现这些特征只在一半的样本中检测到,而另一半则显示出与健康的表皮关系更密切。这些都表明AK 和 cSCC 存在两种亚型,并分别起源于不同的角质形成细胞分化阶段。总而言之,本文利用高通量技术手段研究鳞状细胞aiDNA甲基化在细胞分化过程中特征性分析,为其临床学的应用奠定了基础。cfDNA是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中的降解的DNA小片段。广西服务表观遗传组测序是什么
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案例2:良性和恶性外周神经鞘膜瘤的比较甲基化组分析 Feber, A., G. A. Wilson, et al. "Comparative methylome analysis of benign and malignant peripheral nerve sheath tumors." Genome Res 21(4): 515-24. MeDIP测序可以对基因组中的甲基化区进行无偏差的分析,而不只局限于基因启动子和CpG岛。本文通过MeDIP测序对恶性外周神经鞘膜瘤、良性神经纤维瘤和正常雪旺细胞中的甲基化组进行了比较分析,找到了101,466个ai症特异性差异甲基化区(cDMRs)。数据表明:这些cDMRs在两类卫星重复序列(SATR1 和ARL a)中明显富集;此外,高甲基化cDMRs在CpG岛岸、非CpG岛相关启动子中明显富集,而低甲基化cDMRs在SINE重复序列中明显富集。通过与基因表达数据的联合分析发现:与CpG岛岸cDMRs相关的基因的表达模式可以区分疾病表型。湖北研究表观遗传组测序案例
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