cfDNA(CellfreeDNA)是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中的降解的DNA小片段,是一种新型的分子标记物。ctDNA(CirculatingtumorDNA)特指来源于tumsor细胞的cfDNA,是液体活检主流方向。报道表明:ctDNA羟甲基化不但可以作为tumsor分子标志物,还可用于追溯tumsor细胞的组织来源。在医疗大趋势下,ctDNA羟甲基化检测既具有极高的科研价值,又具备推进医疗临床实践的巨大潜能,为实现tumsor临床医治的全病程管理提供强有力的支持。利用ctDNA羟甲基化测序,凭一管液体就可以进行tumsor诊断、疗效评估、实时监控、个体化用药、预测复发等,是里程碑式的新型液体活检技术。cfDNA是人体组织排放到血液、尿液或脑脊液等循环体系中的降解的DNA小片段。广东项目表观遗传组测序价格
不同于已经得到深入研究的基因组 DNA 的表观遗传修饰,ctDNA 的 5mC 甲基化修饰研究仍然是一个未被充分探索的领域,对于科研者来说是一个尚待挖掘的金矿。既然如此,那我们是不是可以按图索骥,直接将基因组 DNA 甲基化修饰研究的传统方法照搬到 ctDNA 的5mC 甲基化修饰研究上来呢?答案是否定的:因为 ctDNA 含量低、缺乏染色质结构的保护,若直接将研究基因组 DNA 的 5mC 修饰的传统方法应用于 ctDNA,则会遇到南橘北枳的困境,云序生物提供的MeDIP测序服务,将甲基化DNA免疫共沉淀技术(MeDIP)和高通量测序相结合,能够帮助客户快速地获取全基因组范围内的DNA甲基化图谱,并比较不同样品中的甲基化分布差异。中国香港项目表观遗传组测序内容通过Klenow酶修复转座产物的末端缺口。
人体血液循环系统中,含有不断流动的携带一定特征(包括突变,缺失,插入,重排,拷贝数异常,甲基化等)的,来自tumsor基因组的DNA的片段。这些DNA的片段来源于四个部分:1、坏死的tumsor细胞;2、凋亡的tumsor细胞;3、循环tumsor细胞;4、tumsor细胞分泌的外排体。自1977年人类发现ctDNA以来,对其的研究就从未中断过。在1994年,研究人员鉴定了来源于tumsor的含有cancer标志性突变的DNA。加上ctDNA的无创性和易获得性,在其中发现的tumsor标志物,被认为可以用于检测tumsor早期诊断,进展过程,预后判断及个性化用药指导。但是由于ctDNA在人体血液内含量极低,只有循环DNA的1%,甚至万分之一,其测序检测存在巨大的挑战。
案例1:孕妇血浆中胎儿环状DNA的特征是:呈甲基化状态以及被clear原文:CharacteristicsofFetalExtrachromosomalCircularDNAinMaternalPlasma:MethylationStatusandClearance期刊:ClinicalChemistry影响因子:8.322近期,NIPT之父卢煜明教授团队开发了一种环状DNA甲基化分析的测序方案,通过对不同产后时间点的胎儿环状DNA含量的评估,研究了胎儿环状DNA的体外clear效率。作者还发现血浆中的胎儿环状DNA与母体环状DNA相比甲基化程度相对较低。此外,和胎儿线性DNA类似,胎儿环状DNA在分娩后从母血中迅速clear。总之,该团队基于转座酶和m5C位点酶学转化方法开发出了环状DNA甲基化测序技术,并揭示了孕妇血浆中的胎儿环状DNA甲基化状况,为环状DNA的深入研究及新型分子标志物的开发提供了新的技术手段。ctDNA甲基化不但可以作为tumsour分子标志物,还可用于追溯tumsour细胞的组织来源。
1、DNA甲基化富集峰的识别通过高通量测序和生物信息分析,识别甲基化富集的基因组区域,默认p<=1e-5(具体参数以报告为准,云序生物会根据数据,适当调整参数)的峰为统计上明显的甲基化区注:每个样品组做一个Input,以去除基因组背景,降低假阳性率2、DNA甲基化区域富集峰的注释富集峰识别后,得到的是一堆基因组位置信息,通过生物信息分析利用邻近基因对富集峰进行注释,并根据峰中点相对于已知基因的位置,将富集峰为启动子峰、上游峰、内含子峰、外显子峰、基因间峰还在tumsour发生和发展机理研究中发挥着重大的潜在价值。辽宁研究表观遗传组测序分析
目前,环状DNA不但可以作为一种新型特异的tumsour标志物。广东项目表观遗传组测序价格
ATAC测序的全称是AssayforTransposaseAccessibleChromatinusingsequencing,运用测序手段研究转座酶可接近的染色质的一种技术。该技术通过转座酶对某种特定时空下开放的核染色质区域进行切割,进而获得在该特定时空下基因组中活跃转录的调控序列。这项技术只需少量细胞便可获得实时全基因组活性调控序列信息,应用于转录因子结合分析、核小体定位、活性调控元件分布等研究,在表观遗传机制研究领域有广阔的应用前景。云序生物对染色质开放区域进行研究的技术是利用ATAC测序技术,其原理为:利用DNA转座酶可以携带DNA去识别染色质开放区域。人为地将携带已知DNA序列标签的转座复合物(即带着测序标签的转座酶),加入到细胞核中,再利用已知序列的标签进行建库后测序,从而识别染色质的开放区域。广东项目表观遗传组测序价格
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