江苏外泌体荧光标记

外泌体中包含的mRNAs和miRNAs在进入受体细胞后仍具有翻译蛋白质、促进病毒感ran等功能。据估计，单个外泌体含有约≤100拷贝数的蛋白质和≤10000拷贝数的核苷酸。不同细胞来源的外泌体中既包含与细胞形成、结构和物质转运相关的共有成分，也包含与来源细胞的生物功能相关的特异分子。如B淋巴细胞、树突状细胞、肥大细胞和肠上皮细胞来源的外泌体含有大量的主要组织相容性复合体蛋白质MHCclassⅡ和MHCclassⅠ，血小板和T细胞来源的外泌体则包含诸如血管性血友病因子、穿孔素和颗粒酶等特殊蛋白质，而ai细胞来源的外泌体表面可能含有中流特异的蛋白质分子。这类特异分子在外泌体介导细胞信号转导、参与生理病理过程中发挥至关重要的作用。外泌体的异质性可以根据其大小、含量(载物)、对受体细胞的功能影响以及细胞来源来区分。江苏外泌体荧光标记

几乎所有的细胞都可以在自发或在一定刺激条件下产生外泌体，不同的细胞产生的外泌体具有不同的功能，这些外泌体参与了一系列生理和病理过程，如ai症发生与发展、抗原呈递、免疫调节、组织愈合等。来自血细胞(包括血小板、白细胞和红细胞)的外泌体具有参与凝血、提供促血管生成因子、诱导血管生成等生理功能;妊娠期外泌体能够影响局部血管生成、调节分化、激huo免疫、促进胚胎发育;肝脏细胞产生的外泌体有利于维护肝脏内稳态。由此可见，正常细胞产生的外泌体对维持机体的正常生命活动起重要作用。体液外泌体质谱以前无法用超速离心法提取的微囊泡，也通过运用PS亲和法实现高纯度提取。

外泌体是由细胞细胞质内的晚期内泡小体以膜融合的方式通过胞吐方式主动分泌到细胞外环境的一种直径30-100nm的微型囊泡，其形态规则，呈圆形或椭圆形杯状结构，不同类型细胞分泌的外泌体具有很多共性，包括膜上富含脂筏及丰富的跨膜蛋白，如四次跨膜蛋白家族成员CD63、CD81等，表面为类似于细胞膜的脂质双分子层，具有一定的疏水性。外泌体能够携带微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白质等生物活性分子，并在细胞外环境稳定存在，而且通过传递供体细胞信息，调节靶细胞的代谢通路。外泌体可由多种类型细胞分泌，妊娠期母体血清中存在表达胎盘碱性磷酸酶（placentalalkalinephosphatase,）的胎盘来源外泌体，并且在妊娠中发挥重要的作用。

超速离心是外泌体提取较常用的方法也被认为是金标准，主要是根据外泌体的沉降系数、大小和形状将其分离出来。首先4℃低速离心（300-500g，10min）去除死细胞以及细胞碎片，随后以较高离心速度(2000xg，10min)去除生物聚合物以及凋亡小体，然后用10000xg,30min离心去除大型囊泡，结尾以超速离心沉淀外泌体。通过悬浮以及重复超速离心去除外泌体沉淀中的非外泌体蛋白。超速离心法具有操作简单、不易被分离试剂污染、获得的外泌体数量较多等优点。但是此方法需要昂贵的超高速离心机，每次处理的样本量较小，费时，电镜鉴定时还发现外泌体易聚集成块，且上清中仍能检测到大型囊泡，纯度不高，另外高速离心会损伤外泌体影响下游实验。外泌体通过内体途径分泌到细胞外空间，并将各种生物活性分子（货物）转运至靶细胞。外泌体为细胞疗法中的不同合成分子和生物分子的递送提供了广阔的前景和崭新的诊疗领域。

作用机制主要是旁分泌的间充质干细胞（MSC）被普遍地用于医治各种人类疾病。已经证明没有一个因素足以调解MSC的医治效果。然而，由许多细胞（包括MSC）分泌的外泌体膜囊泡是有吸引力的候选物作为其功效的载体。外泌体可以运输和运送大量的蛋白质、脂质和核酸，并可以改变细胞和身体部位的功能。除了作为细胞间通讯的关键作用之外，外泌体越来越多地被认为是疾病的生物标志物和预后因子。此外，它们有潜力被用作临床应用基因和药物递送的载体。该文回顾了外泌体的生物发生、分子组成及其作为细胞间通讯的信使的作用，着重于其作为干细胞医治的载体的潜力。外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。细胞外泌体蛋白质组学

外泌体又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。江苏外泌体荧光标记

目前市面上开发的外泌体提取试剂盒，是根据外泌体表面由类似于细胞膜的脂质双分子层具有一定疏水性这一特性，用试剂捆绑水分子，从而可通过常规离心收集沉淀获取外泌体。这种快速提取外泌体的方法虽简便快捷、样本需求少、对设备要求低，但与差速离心方法类似，其分离得到的沉淀包含其他细胞分泌的囊泡，且血清中含有大量血清蛋白分子，成分复杂，很可能掺杂一些未知的疏水大分子物质。Sabapatha等曾根据来源于胎盘的外泌体表面特异表达这一特性，使用耦合到磁珠的抗抗体，采用磁珠分选方法分离血浆中胎盘来源外泌体。此法可以提取的胎盘外泌体量少，不适用于大规模提取制备，且免疫磁珠价格昂贵，不利于提取技术的普及。江苏外泌体荧光标记

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