细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法:生物转染,物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体,以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因,无论哪一种都需要特定的设备,且一分钱一分货,性能好的价格也都很性感。上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商,更多关于转染试剂相关问题,欢迎咨询上海曼博生物!PEI转染试剂有哪些品牌?SigmaPEI转染试剂品牌比较
1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。
PolysciencesPEI转染试剂中国代理权哪个品牌的PEI转染试剂转染效率高呢?
PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限,被逼无奈只能放弃脂质体2000,选择PEI,以至于相当长的时间内,转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点:1.PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书,所用质粒尽量去内2.转染时,一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中,顺序不可错,轻微混匀,静止20min3.转染后4小时,一定要换液!换含有FBS的完全培养液!因为PEI对细胞毒性太大4.如果后续试验涉及到稳定筛选,建议把血清浓度适当提高。
接种细胞:转染前,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商,更多关于转染试剂相关问题,欢迎咨询上海曼博生物!PEI转染试剂是不含动物源成分的。
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细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法:生物转染,物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体,以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因,无论哪一种都需要特定的设备,且一分钱一分货,性能好的价格也都很性感。
Polysciences是一家化学品制造公司,产品广泛应用于各个科研领域。公司成立于1961年,起初为电子显微镜提供纳米级样本制备方案,帮助科学家揭示未知领域。上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商,更多关于转染试剂相关问题,欢迎咨询上海曼博生物! SigmaPEI转染试剂品牌比较
上海曼博生物医药科技有限公司成立于2019-02-15,同时启动了以PL Bioscienc,Quan-Lab,Polysciences,Sirion Biote,CN-Bio,Dharmacon,Horizon,Pfenex,Visual Prote为主的血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机产业布局。曼博生物经营业绩遍布国内诸多地区地区,业务布局涵盖血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机等板块。同时,企业针对用户,在血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机等几大领域,提供更多、更丰富的医药健康产品,进一步为全国更多单位和企业提供更具针对性的医药健康服务。公司坐落于自由贸易试验区达尔文路16幢104室,业务覆盖于全国多个省市和地区。持续多年业务创收,进一步为当地经济、社会协调发展做出了贡献。
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