培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源(生长因子)等。(1)碳源:能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源;糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。(2)氮源:能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。只有固氮微生物才能利用N2。培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如,培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素,培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性,培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性,培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件。培养基长时间的高温灭菌会使某些不耐热的物质破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖。四川琼脂培养基制备仪
固体斜面培养基配制:培养基的过滤澄清,液体培养基必须一定澄清,琼脂培养基也应透明无明显沉淀,因此,须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法,滤纸应折叠成折扇或漏斗形,以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去,再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55~60°C的培养基放入大的三角烧瓶内,装入量不得超过烧瓶容量的1/2,每1000ml培养基加入1~2个鸡蛋的蛋白,强力振摇3~5分钟,置高压蒸汽灭菌器中、121°C加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。培养基的分装,培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/3。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵,其外还须用防水纸包扎(现试管一般多有用螺旋盖者)。分装时较好能使用半自动或电动的定量分装器。宁夏培养基制备仪平板培养基要除去冷凝水,否则将影响平板分离培养效果。
培养基制备仪:培养基的种类繁多,但制备的方法大同小异,一般可分为6个步骤:用水、称量、溶解复水、灭菌、pH测定、保存。1、必须选用专门纯净水或者经消毒过后的无菌水。2、培养基进行复水的容器不得用铜锅或铁锅,放置离子混入培养基中,影响微生物的生长。3、容器的体积须大于复水后培养基总体积的2倍,预防出现溢出情况。4、在对培养基进行加热时,若培养基内含有琼脂粉成分,则需要将其充分浸泡一段时间。加热的过程中不断进行搅拌防止出现培养基结底炭化从而造成成分损害。部分培养基则需要使用沸水进行加热,预防发生局部烧焦及沸腾溢出。5、琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热,较多只能加热两次,第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。6、而当对培养基实施灭菌时,需严格按照说明规范操作。但是也不能盲目按照说明的时间进行,需结合实际情况,合理调节灭菌时间,防止出现培养基灭菌过度而造成的成分变性。
马铃薯培养基的制作过程:(1)称量和熬煮:按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。(2)加热溶解:把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。(3)分装:按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。(4)加棉塞:培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。
培养基的制备原则和要求:培养基是根据各类微生物生长繁殖的需要,用人工方法把多种物质混合而成的营养物。一般用来分离、培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养基。在制备培养基时,应掌握如下原则和要求:(一)培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净,称取的份量务必准确。(二)培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2~7.6,呈弱碱性。调节氧化还原电位(Eh)各种微生物对培养基的Eh要求不同。浙江不锈钢内桶培养基制备仪
配制培养基的原则:根据培养目的需要选择适宜的营养物质。四川琼脂培养基制备仪
培养基制备器:主要应用于液体培养基及微生物培养基的培养基制备器。高效的加热和冷却,良好的加热元件能确保快速加热。培养基容器外壁的水循环能保证快速冷却。通过热交换器不断地将热的去离子水冷却。总循环时间为60至120分钟,包括加热、灭菌和冷却,具体时间取决于容器的大小,培养基的量和冷却水的温度。无菌过滤的支持压力可以防止培养基发泡或溢沸。触摸屏技术,新使灭菌器操作起来有了更多的选择,增加了灵活性。加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。四川琼脂培养基制备仪
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