购买的培养基到货后,应有专人做好接受和验收工作,应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。每批培养基到货后都应对培养基的质量进行检测,满足检测方法规定的要求后方可投入使用。培养基的储存:干粉培养基应保存在阴凉干燥处,要避免阳光直射;未开瓶的培养基在室温下的保存期限以厂家提供为准,开瓶后的干粉培养基易吸湿,应注意防潮并尽快用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查,如容器密闭性复查、开封日期、内容物的感官检查,如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。培养基制备器利用各种动、植物或微生物的原料,其成分难以确切知道。全自动培养基制备器哪家好
培养基配制:素:为防止培养时期细菌的污染,可在培养基中添加适当素,一般用量与组织细胞培养相同:卡那霉素100单位/毫升,或双抗--青霉素100单位/毫升,链霉素100微克/毫升。植物血凝素(PHA):非增殖期的细胞不能制备染色体,如人外周血淋巴细胞,但在离体培养过程中,在PHA的作用下,可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。PHA有粘多糖,蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂,蛋白质起凝集作用。PHA的细胞数随其浓度而增加,直至全部免疫活性细胞均被为止,但PHA浓度过高会引起凝集,一般采用4%浓度为好。内蒙古全自动培养基制备器全自动培养基制备仪主要特点:不会产生气泡。
培养基各成份的混合和溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅,以防有微量铜或铁混入培养基中,使细菌不易生长。好好使用不锈钢锅加热溶化.也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动,以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化.迄至煮沸。如为琼脂培养基,应先用一部分水将琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,较后必须加以补足。
培养基制备基本方法:培养基配方的选定,同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此,除所用的是标准方法,应严格按其规定进行配制外,一般均应尽量收集有关资料,加以比较核对,再依据自己的使用目的加以选用,记录其来源。培养基pH的初步调整,培养基各成分完全溶解后,应进行pH的初步调正,因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化,例如,牛肉浸液约可降低pH0.2。而肠浸液pH却会有明显的升高。因此,对这个步骤,操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的很终pH,保证培养基的质量。pH调正后,还应将培养基煮沸数分钟,以利培养基沉淀物的析出。培养基制备器内部的管道和容器可以更换,方便移除和清洗。
培养基配制:配制用水,培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。培养基:培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。血清:培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒,以利于培养基的彻底灭菌。培养基制备器
培养基制备器都是微处理器控制的,而且灭菌之后保持的温度是可以预设的。全自动培养基制备器哪家好
培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项:确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用细菌、及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。其它:高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证,确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证,后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。另外,应将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独自的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。全自动培养基制备器哪家好
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