陕西技术环状DNA

1. eccDNA成环的整体统计 eccDNA测序结果充分体现了基因组水平成环的多样性。eccDNA来源十分丰富，同一个基因有可能会产生非常多的环状，同样一个环状也不onlyonly只会包含一个外显子。TTN基因就是一个非常典型的例子。该基因长度达到了0.3Mb，而这样一个基因竟然能衍生得到130个eccDNA，是一个经典的编码基因区域成环的案例。其中比较有代表性的是43-66以及44-52号外显子所组成的环状分子。eccDNA测序的目的正是在组学的层面上的描述刻画eccDNA的成环多种可能性。在tumour中，主要的ai基因转录本是直接来自于环状DNA的，而环状DNA的染色质是高度开放的。陕西技术环状DNA

传统上，环状DNA被认为only存在于原核生物以及部分病毒当中，在真核生物当中，only有半自主细胞器线粒体和叶绿体当中具有环状DNA。1964年，伊利诺伊大学的YasuoHotta和AlixBassel却在小麦的胚和公猪精ye当中发现了环状DNA，证明了这种看似结构怪异的DNA在高等植物和哺乳动物中亦存在。从1960年代至今的半个多世纪里，研究者已经在几乎所有的物种当中发现环状DNA的踪迹。因为这些环状DNA存在于染色体之外，因此也得名“染色体外环状DNA”（extrachromosomalcircularDNA，简称eccDNA）。不过，eccDNA虽然早已被证明普遍存在，但是囿于分离纯化以及测序技术的限制，学界对于eccDNA的认知，却是只知其存在，不知其来历。西藏环状DNA是什么一种新的环状RNA，CIRC-CCAC1，有助于CCA的进展，诱导血管生成，并破坏血管内皮屏障。

eccDNA的大小从几百bp到几十Mb不等，其中较小的一种是2012年Science报道的被称作MicroDNA的特殊的eccDNA，大小只有200-400bp，有片段过短，因此不能携带完整的基因序列；但是目前MicroDNA被认为具有一些重要的调节功能，包括调控RNA的转录过程，或者通过分子海绵的作用调控一些非编码RNA的表达，同时这种DNA也被认为是可能在未来应用于液体活检来监测ai症的发生和发展的一种体外游离DNA的形式。双微体形式存在的eccDNA一般较大，100kb-3Mb等，很多可以在光学显微镜下被观察到，能够携带一些完整的基因结构和上游的调控序列。

案例1：母体血浆中染色体外环状DNA的鉴定与特性分析 作者观察到在孕妇的血浆中存在染色体外环状DNA (环状DNA)，并通过限制性内切酶和Tn5转座酶处理后的改良的测序方法，在孕妇的血浆中鉴定出了环状DNA分子。他们发现血浆的环状DNA分子比线性的长，在这些环状DNA分子中，胎儿来源的环状DNA短于母体来源的环状DNA。此外，环状DNA的闭合圆形结构可能允许抗外切酶，因此这些分子比它们的线性对应物具有更高的稳定性。这些特性为环状DNA的研究和生物标志物的开发提供了机会。游离于染色体基因组之外的DNA 被发现常常以环状的形式存在，这种形式的DNA被称为环状DNA 。

A&ABio的环状DNA纯化柱技术简介研究组织、细胞的环状DNA测序常用Circle-seq技术，Circle-seq测序中就包含柱纯化去除线性DNA，具体步骤是柱纯化去除基因组DNA、外切酶对柱纯化后产物进行酶消化、滚环扩增放大环状DNA信号以及best后建库测序。因此，相对于大量存在的基因组DNA，环状DNA在细胞中的含量非常少，所以从样品中提取总DNA后，第一步需要通过柱纯化去除基因组DNA，以免测序中基因组DNA占据大部分数据量。柱纯化这一步骤十分关键，既要best大限度地去除基因组DNA,又需best大限度保留环状DNA分子，尤其是避免丢失掉超长和超短的环状DNA。云序生物采用A&ABiotechnology的纯化柱，是绝大部分环状DNA高分文章中所使用的纯化柱。采用多种方法高效地富集环状DNA，环状DNA检出率高。测序环状DNA测序

云序优势：精确地数据，速度快，效率高。陕西技术环状DNA

样本要求样品类型：细胞、组织、基因组DNA。其它类型样品请详询。样品量：a）细胞2×107b）组织200mgc）DNA：>=10µg，溶于无菌水或TE（PH=8）（OD260/280值应在1.7～2.0之间；RNA应该去除干净；不得有其它个体或其它物种的DNA污染）。样品运输及保存：样品运输：样品置于1.5mLEppendorf管中，封口膜封好，干冰运输，DNA可用冰袋运输。样品保存：细胞样品或新鲜组织块切块，液氮冻存后-80℃保存；DNA样品短期内可-20℃，避免反复冻融。陕西技术环状DNA

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